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一、转录的概念:以DNA为模板,以4种NTP为原料,在RNA聚合酶的作用下合成RNA分子的过程。通过转录将DNA的遗传信息转抄到RNA(mRNA,rRNA,tRNA)上,mRNA可作为模板指导蛋白质的合成。二、转录体系:DNA模板、4种NTP、RNA聚合酶、蛋白因子(包括转录因子)、无机离子(Mg++、Zn等)等。转录起始位点(startpoint)。将转录起始位点标记为+1转录终止位点(terminationsite)也叫终止子(terminator)。5′-端上游(upstream)序列,3′-端下游(downstream)序列,启动子(promoter):能够被RNA聚合酶识别并与之结合,从而调控基因的转录与否及转录强度的一段DNA序列称为启动子。全部原核生物基因及绝大部分真核生物基因的启动子位于转录起始位点的上游序列中,只有真核生物RNA聚合酶III的启动子位于转录起始位点的下游序列中。转录单位(transcriptionunit):从启动子到终止子之间的DNA片段,称为一个转录单位。或者更确切地说,被转录成单个RNA分子的一段DNA序列,称为一个转录单位。基因是指负责编码一条多肽链的DNA片段。后来发现,有的基因只转录成RNA(如tRNA或rRNA)而不编码多肽链,所以,基因的确切定义应是:被转录成RNA的DNA片段。将负责编码蛋白质多肽链的DNA片段称为结构基因(structuralgene)。一个转录单位可以是单个基因——单顺反子(monocistron),也可以是多个基因——多顺反子(polycistron)。第一节转录特点②DNA双链中只有一条链被转录成RNA在DNA双链中,负责转录合成RNA的DNA链叫模板链(templatestrand),另一条链叫编码链(codingstrand)。模板链与编码链互补,模板链转录合成的RNA的碱基顺序与编码链的碱基顺序完全一致,只是其中的T被U取代而已。③转录的方向为5′→3′DNA模板:第二节原核生物基因的转录RNA聚合酶(DDRP):EcoliRNA聚合酶由5个亚基组成:α2ββ’δ亚基①在基因的5′端,直接与RNA聚合酶结合,控制转录的起始和方向;②都含有RNA聚合酶的识别位点、结合位点和起始位点;③都含有保守序列,而且这些序列的位置是固定的,如-35序列,-10序列等。-35bp存在一段保守序列(共有序列)TTGACA,RNA聚合酶的σ亚基识别该序列并使核心酶与启动子结合,故又称-35序列,为RNA聚合酶的识别位点;-10序列又叫Pribnow盒(Pribnowbox),其共有序列为TATAAT,是RNA聚合酶与之牢固结合并将DNA双链打开的部位,即结合位点,形成所谓的开放性启动子复合物。三、原核生物的转录过程RNA链的延伸:当第一个磷酸二酯键生成并释出σ亚基后,核心酶即沿DNA模板移动,并按碱基互补配对的原则,以与第一个磷酸二酯键生成的相同反应方式,依次连接上核苷酸,使RNA链延伸。核心酶沿DNA模板移动的方向则为3′→5′,因为模板链与新生成的RNA链是反平行的。转录泡(transcriptionbubble),在转录泡里,新合成的RNA与模板DNA形成杂交双链,长约12bp。在转录泡里,核心酶始终与DNA的编码链结合,使双链DNA约有17bp被解开。转录的终止:主要过程包括:停止RNA链延长;新生成RNA链释放;RNA聚合酶从DNA上释放。当RNA聚合酶沿DNA模板移动到终止子序列时,转录就停止了。原核生物基因转录终止的方式有两种:不依赖于ρ因子的终止和依赖于ρ因子的终止。ρ因子又叫终止因子(terminationfactor),是从大肠杆菌中分离出来的一种275000大小的六聚体蛋白质,它具有两种活性:促进转录终止的活性和NTPase活性。后者是前者所必需的。(2)依赖ρ因子的终止方式,必需在ρ因子存在时才发生终止作用,依赖ρ因子的终止子序列富含碱基C,但缺乏碱基G,其回文结构不含富有CG区,也没有寡聚U。依赖ρ因子的终止子在细菌染色体中少见,而在噬菌体中广泛存在(p465)。ρ因子可能是先附着在新生成的RNA链上,然后沿着5′→3′方向朝RNA聚合酶移动,移动的能量由ATP水解供应。当ρ因子与RNA聚合酶接触后,将新生成的RNA链释放出来。rRNA前体的加工tRNA前体的加工:tRNA的种类比rRNA多,在原核生物中有30~40种,在真核生物中有50~60种。关于tRNA3′-末端-CCA的来源问题,在原核生物tRNA生物合成中有两种情况,一种是初始转录物自身就有-CCA,它们位于成熟tRNA序列与3′端附加序列之间,经转录后加工切除掉附加序列,-CCA便暴露出来;第二种则是其自身并无-CCA序列,它是在切