激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用【摘要】目的：研究肝X受体激活对海马神经元神经甾体合成的影响.方法：将大鼠海马神经元体外培养至第7日，在培养液中加入μmol/LTO901317，继续培养48h.应用高效液相质谱联用分离测定培养液中游离型神经甾体孕烯醇酮、脱氢表雄酮和结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯、脱氢表雄酮硫酸酯的含量；RTPCR方法观察海马神经元P450侧链裂解酶、甾体合成快速调节蛋白和3β羟基甾醇脱氢酶等神经甾体合成关键酶基因的mRNA的表达.结果：TO901317激活LXR，促进P450scc，StAR和3βHSD的mRNA表达，增加海马神经元培养液中神经甾体PREG，DHEA，PREGS和DHEAS含量.结论：LXR激活时，可通过上调海马神经元P450scc，StAR和3βHSD的mRNA表达，促进神经甾体的合成.【关键词】肝X受体；P450侧链裂解酶；神经甾体；海马,神经元【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofliverXreceptor(LXR)activationonthesynthesisofneurosteriodinhippocampalneurons.METHODS:Onday7ofculture,hippocampalneuronsweretreatedwithμmol/LTO901317dissolvedindimethylsulfoxidefor48h.ThemRNAexpressionsofP450sidechaincleavage(P450scc),steroidogenicacuteregulatoryprotein(StAR)and3βhydroxysteroiddehydrogenase(3βHSD)weremeasuredbyRTPCRandthecontentsofunconjugatedneurosteriodspregnenolone(PREG),dehydroepiandrosterone(DHEA)andconjugatedneurosteroidspregnenolonesulfate(PREGS),dehydroepiandrosteronesulfate(DHEAS)inmediumwereanalyzedanddeterminedusinghighperformanceliquidchromatographymassspectrometry(HPLCMS).RESULTS:IncubationofhippocampalneuronswithTO901317significantlyincreasedtheexpressionsofP450scc,StARand3βHSDmRNAandthelevelsofPREG,DHEA,PREGSandDHEAS.CONCLUSION:ActivationofLXRcontributestothesynthesisofneurosteriodbyupregulatingtheexpressionsofP450scc,StARand3βHSDinhippocampalneurons.【Keywords】liverXreceptor;P450sidechaincleavageenzyme;neurosteroid;hippocampus;neurons0引言中枢神经系统的胆固醇在甾体合成快速调节蛋白的引导下被转运到线粒体内膜，然后由P450侧链裂解酶催化生成孕烯醇酮，后者在3β羟基甾醇脱氢酶等的催化下转化成脱氢表雄酮，PREG和DHEA在磺基转移酶的催化下生成结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯和脱氢表雄酮硫酸酯，发挥生物效应.体外培养海马神经元和小鼠阿尔茨海默病模型均表明，用人工合成配体TO901317激活肝X受体能增加其下游基因ATP结合盒转运体A1的表达，阻止AD发生［1-2］.本实验旨在观察LXR激活时对海马神经元神经甾体的合成和分泌有何影响.1材料和方法材料DMEM、优级胎牛血清；L左旋多聚赖氨酸、阿糖胞苷、二甲基亚砜、TO901317；胰蛋白酶；Trizol；逆转录试剂盒；pfuDNA聚合酶；Agilent液相色谱质谱联用仪［HP1100自动进样器、大气压化学离子源(APCI)及四极杆质谱检测器］；神经甾体标准品.方法海马神经元原代培养及处理采用文献［3］的方法，并稍加以改动.取当日新生Wastar大鼠，750mL/L乙醇消毒，取出完整脑组织置于DMEM中，钝性分离海马并去除血管和脑膜，将海马剪成1mm×1mm×1mm小块，g/L胰蛋白酶，37℃消化25min.等体积种植液即含100mL/L胎牛血清和1×105U/L青、链霉素的DMEM终止消化5mi