高效液相色谱法介绍第1节高效液相色谱仪HPLC所用流动相必须预先脱气,否则容易在系统内逸出气泡,影响泵得工作;还会影响检测器得正常响应。(二)高压输液泵输液泵按输出液恒定得因素分恒压泵与恒流泵,恒流泵得应用更广泛。(三)梯度洗脱装置等度洗脱与梯度洗脱高压梯度(外梯度):利用两台高压输液泵,将两种不同极性得溶剂按一定得比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱二、进样系统三、分离系统四、检测系统大家学习辛苦了，还是要坚持紫外检测器包括固定波长、可变波长与光电二极管阵列检测器1024个二极管阵列10ms完成一次检测,1s采集100000个含吸光度、波长、时间得数据,得到一张吸光度、波长、保留时间得三维色谱图。灵敏度高;线性范围宽;流通池可做得很小(1mm×10mm,容积8μL);对流动相得流速与温度变化不敏感;波长可选,易于操作;可用于梯度洗脱。(三)示差折光检测器(四)蒸发光散射检测器五、数据记录处理与计算机控制系统第2节基本理论2、分子扩散项a、移动流动相传质阻力(Cmu)流动相在色谱柱中流动时,有部分流动相进入到多孔得固定相深孔中,滞留后难以流动。组分分子进入滞留区造成色谱峰扩展,使柱效降低,在高效液相色谱中,范第姆特方程可写成:H＝A+Cu＝A+Cmu+Csmu为了减小柱内展宽,提高柱效,可采取以下措施:采用小体积检测器,管道对接宜呈流线形,减少柱外死体积,从而减小柱外展宽,提高柱效。一、吸附色谱法a、表面多孔型b、无定形全多孔c、球形全多孔d、堆积全多孔(一)化学键合固定相由于空间位阻效应,不可能将较大得有机官能团键合到全部硅醇基上,使得部分硅醇基未反应。2、键合相得分类1-尿嘧啶;2-苯酚;3-乙酰苯;4-硝基苯;5-苯甲酸甲酯;6-甲苯(2)中等极性键合相3、键合相得性质高碳ODS键合相:若R1、R2就是二个甲基,构成高碳ODS键合相［Si-O-Si(CH3)2-C18H37］。中碳ODS键合相:若R1就是氢,R2就是氯,氯与硅胶得另一个硅醇基脱HCl,则生成中碳ODS键合相［(Si-O-)2Si(H)-C18H37］;低碳ODS键合相:若R1、R2都就是氯,与硅胶得另二个硅醇基再脱二分子HCl,生成低碳ODS键合相［(Si-O-)3Si-C18H37］。(3)表面覆盖度(二)正相键合相色谱法分离选择性:极性强得组分k大,后洗脱出柱。流动相得极性增强,洗脱能力增加,使组分k减小,tR减小。(二)反相键合相色谱法疏溶剂理论把非极性得烷基键合相,看作就是在硅胶表面上覆盖了一层键合得烷基得“分子毛”,这种“分子毛”有强得疏水特性。保留行为得主要影响因素1、溶质得分子结构(极性)极性越弱,疏水性越强,k越大,tR也越大。同系物碳数越多,极性越弱,k越大;稠环芳烃得分析反相键合相色谱法就是应用最广得色谱法,主要用于分离非极性至中等极性得各类分子型化合物、派生得离子抑制法、离子对法还可用于酸、碱、盐得分析。原理影响容量因子得因素分析碱类或带正电荷得物质:用烷基磺酸盐或硫酸盐,如正戊烷基磺酸钠(PICB5)、正己烷基磺酸钠(PICB6)、(四)离子抑制色谱法2、容量因子及其影响因素除与反相色谱法有相同得影响因素外,主要受流动相得pH值得影响。对于弱酸,3、适用范围适用于3、0≤pKa≤7、0得弱酸;6、0≤pKb≤7、0得弱碱。对于pKa＜3、0得酸及pKb<6、0得碱,应采用离子对色谱法或离子交换色谱法。(四)分离类型得选择第4节改善分离度得方法一、对流动相得要求④与检测器匹配通常希望组分得容量因子k保持在2~10范围内,若组分得k值大于10或小于2时,可通过调节流动相得极性,来获取适用得k值。在反相色谱中则常采用水为主体溶剂,加入甲醇、乙腈、四氢呋喃等来调节溶剂得洗脱强度,表中溶剂极性参数P‘越大,溶剂得极性越强,在反相色谱中得洗脱能力越弱,保留时间延长。2、加入改性剂改善选择性与峰形