Real-timeqPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手Real-timeqPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手目录前言……………………………………………………………….….………...3一一一、一、、、Real-timeqPCR发展史………………………………………..…….…..3二二二、二、、、Real-timeqPCR概述………………………………………….…………3三三三、三、、、Real-timeqPCR实验设计………………………………………………8四四四、四、、、Real-timeqPCR操作过程…………………………………………….…9五五五、五、、、Real-timeqPCR数据分析…………………………………………...…16六六六、六、、、Real-timeqPCR常见问题分析…………………………..……….……192北京百泰克生物技术有限公司www.bioteke.comE-mail:info@bioteke.comTel:010-629517816297940882783852Real-timeqPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手Real-timeqPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手前言由于Real-timeqPCR的众多优点，，，现在已经是，现在已经是生命科学领域的一项常规技术术术。术。。。越来越多的研究文章中涉及越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，，，也基本上被，也基本上被real-timeqPCR所代替。。。由于。由于real-timeaPCR输出的数据不同于常规的PCR电泳检测，，，很，很很很多没多没有做过real-timeqPCR的研究者常常感到高深莫测，，，不知从何入手，不知从何入手；；；甚至一些；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，，，不知所措，不知所措。。。本文就从。本文就从real-timeqPCR的发展史说起，，，包括，包括real-timeqPCR的原理，，，实验设计，实验设计，，，实际，实际操作（（（以（以以以ABIStepOne仪器，，，和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例，和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例），数数数据分析，，，常见问题解答五个方面，常见问题解答五个方面，，，手把手教你从各个方面了解，手把手教你从各个方面了解real-timeqPCR，，，彻底的从菜鸟到高手！！！一一一、一、、、Real-timeqPCR发展史Real-timeqPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，real-timeqPCR由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。设在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。在Real-timeqPCR技术的发展过程中，定量PCR仪的发展起了至关重要的作用。1995年，美国PE公司（已经并入Invitrogen公司）成功研制了Taqman®技术，1996年推出了首台荧光定量PCR检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过Ct值进行数据分析。从而荧光定量PCR获得广泛应用。现在的定量PCR仪有ABI7000、7300、7500，7700、7900HT、StepOnePlusTM、StepOneTM、PRISM®StepOneTM系列；BIO-RAD的CFX96、iCycleriQ5®、MyiQ®、MJResearchChromo4TMOpticon系列；StratageneMxTM系列；RocheLightCycler®系列；EppendorfMasercycler®；CorbettRotor-GeneTM；CepheidSmartCycler®和BIOER的LineGene系列（考虑到其是日资子公司，还是不并入国内企业吧！）。随国内生命科学的快速发展，科研水平不断提高，发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时，国内公司经过长期不懈的努力，也有自主研发的real-timePCR仪器生产比如西安天隆科技公司的TL系列仪器。二二二、二、、、Real-timeqPCR概述1.Real-timeqPCR原理实时PCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时3北京百泰克生物技术有限公司www.bioteke.comE-mail:info@bioteke.comTel:010-62951