二○一○年第二期研究报告基于胶束电动色谱法区分绿茶的研究田莉叶能胜谷学新李金枝（首都师范大学化学系北京100048）75摘要基于胶束电动色谱法建立不同种类绿茶的分类方法。色谱条件是：m×57cm有效长度50cm未涂层熔融石英毛细管，电解质为20mM磷酸盐含20mM十二烷基硫酸钠SDS的溶液pH7.0，分离电压20kV，温度25℃，0.5psi压力进样5s，检测波长210nm。此法可同时检测5种儿茶素组分，以5种儿茶素的含量为指标，采用聚类分析法对不同绿茶分类，结果：不同种类的绿茶具有明显差异，该研究可为绿茶品质鉴定提供一种合理、准确、可靠的方法。关键词茶叶儿茶素胶束电动色谱法聚类分析茶多酚是茶叶中多种酚类物质的总称，是茶叶P/ACETMMDQ高效毛细管电泳仪（美国中具生物活性的成分。其中，儿茶素（Catechin）Beckman公司）未涂层熔融石英毛细管（75m；又称茶单宁，是多羟基黄烷-3-酚的总称，它是茶i.d.×57cm，有效长度50cm）河北永年锐沣色多酚的主体成分。研究表明其具有抗肿瘤、抗氧化、谱器件有限公司；Milli-Q超纯水系统美国Mil-抗心脑血管疾病等重要的生物活性12。它为还原lipore公司。性多元酚类物质，在水溶液中易被空气氧化，常用甲醇（色谱纯，美国Fisher公司），磷酸二氢作抗氧化剂。右旋儿茶精还有降低毛细血管的通透钠、磷酸氢二钠和氢氧化钠（分析纯，北京化工厂），性、止泻、止血、抗病毒、杀真菌、抑制ACE及十二烷基硫酸钠SDS（分析纯，美国Sigma公司），预防胃溃疡等多种作用。儿茶素含量约占茶多酚总--表没食子儿茶素EGC、--表没食子儿茶素没量的90左右，是决定茶叶品质的重要因素。在食子酸酯EGCG、--表儿茶素EC、--没食子绿茶中主要以L---表没食子儿茶素没食子酸酯儿茶素没食子酸酯GCG、--表儿茶素没食子酸酯epigallocatechingallateEGCG，L---表没食子儿ECG（美国Sigma公司，纯度分别为98，95，茶素epigallocatechinEGC，L---表儿茶素没食98，98，98）绿茶样品（西湖龙井、信阳毛尖、；子酸酯epicatechingallateECG，L--表儿茶素碧螺春）购于北京吴裕泰茶庄，实验用水为Milli-QepicatechinEC，L--没食子儿茶素没食子酸酯超纯水，所用溶液均用0.45m微孔滤膜过滤。gallocatechingallateGCG等形式存在。1.2实验方法目前测定儿茶素方法很多，包括分光光度法3、1.2.1色谱条件缓冲液：电解质为20mM磷酸发光分析法4、近红外光谱法5、电化学分析法6盐含20mM十二烷基硫酸钠SDS的溶液pH7.0；以及广泛应用的高效液相色谱法711、毛细管电泳法20分离电压：kV；250.5分离温度：℃；psi压力12等色谱方法。本报告采用胶束电动色谱法（MEKC）下进样5s；检测波长：210nm.进样前依次用0.1同时测定绿茶中的--表没食子儿茶素EGC、--M氢氧啤⒊克突撼逡悍直鸪逑?2min。表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、--表儿茶素1.2.2茶汤溶液的制备准确称取1.00g茶叶于EC、--没食子儿茶素没食子酸酯GCG、--表250mL烧杯中，加入200mL沸水，100℃水浴提儿茶素没食子酸酯ECG5种儿茶素组分，并以5种取30min，冷却至室温，过滤到250mL容量瓶中，儿茶素的含量为指标，用聚类分析法对所测不同品用少量水洗涤容器及残渣，滤过，并入滤液，加水种的绿茶样品进行分类，反映不同种类绿茶的差异。定容，摇匀，过0.45m微孔滤膜待测。1.2.3标准品溶液的制备精密称取各标准品，1实验部分用甲醇配置成500μg/mL的混合标准储备液，41.1仪器与试剂℃冰箱中避光保存。基金项目：北京市教委科技发展项目（KM200710028010）通讯联系人：谷学新，男，硕士研究生导师；E-mail：guxuexin263.net37现代仪器www.moderninstrs.org.cn二○一○年第二期2结果与讨论2.1电泳条件的优化2.1.1缓冲溶液酸度及浓度的选择缓冲溶液的pH值对电渗流EOF和分析物的离子化程度有很大影响。考查范围在6.08.0之间，固定磷酸盐浓图1混合标准溶液的色谱图度为20mM，SDS浓度为20mM。结果表明：pH表1各成分标准曲线和检出限为8时五种物质分离不开，pH为67.5时分离度组分回归方程相关系数线性范围检出限r2/g/mLg/mL都较好，但综合考虑整体出峰时间及灵敏度等因素，EGCY6184.1x-250210.998353001.50选择pH7.0为优化条件，pH7.0时各组分出峰时EGCGY4518x-275740.997753001.00间相对较短