会计学1.蛋白质互作研究的意义2.蛋白质互作（事例）3.细胞内蛋白质标记4.其他进展1.蛋白质互作研究的意义(Importance)分子水平：基因组DNA：基因重排，Ig多样性基因序列多样性（Science.2004，305:251-254），抵抗不同病原（低等动物）等作用DNA修饰，甲基化（epigenomics），S修饰等mRNA：启动子，ChIP，EMSA非编码小RNA（siRNA，miRNA，piRNA）（epigenomics）蛋白质：蛋白质互作（蛋白质组学）蛋白质结构（工具，生物信息学）蛋白质标记（细胞固定，活细胞标记）异构体//2.蛋白质互作（protein-proteininteraction）事例病毒-对虾蛋白互作经济模式动物（1）模式识别：模式识别因子（2）信号转导：受体藕联蛋白信号转导（3）抗病毒效应：干扰素,抗病毒肽,细胞凋亡,细胞吞噬。特异性免疫抗病对虾：mRNA差异显示技术（DD-PCR），抑制差减杂交，亲和层析Rab6:抗病毒对虾中上调表达说明在抗病毒免疫反应中起作用重要的小G蛋白小G蛋白:GTPase,20-25kDaCell,2007,129:865ThierryGalvezetal.2012.Cell151:234Rab蛋白:所有的真核生物中都有Rab蛋白酵母中的Rab蛋白称为Ypt蛋白,7个Rab蛋白线虫(Celegans)29种Rab蛋白果蝇(Drosophilamelanogaster)26种Rab蛋白拟南芥(Arabidopsisthaliana)57种Rab蛋白人有60多种Rab蛋白G结构域:6个β折叠(β1-β6),5个α螺旋(α1-α5)和5个多肽环。多肽环:β折叠与α螺旋之间由多肽环连接氨基酸序列高度保守Mg2+和鸟嘌呤的结合位点，同时催化GTP水解开关I和开关II:Rab蛋白与它的GEF和GAP的关键位点Rab6在抗病毒对虾中上调表达Co-Immunoprecipitation(CoIP)噬菌体展示蛋白质芯片/4)互作蛋白的鉴定5)蛋白互作的验证/6)功能体内Rab6基因过量表达对血细胞吞噬功能的影响VP466信号通路VP466-tropomyosin-actin信号通路VP466-Rab6-actin信号通路VP466-Rab6-actin信号通路VP466-Rab6-actin果蝇：Rab6-actin果蝇：Rab6-actin蛋白质复合体标记3.细胞内蛋白质标记（proteinlabelinginvivo）荧光标记(fluorecencelabeling)常用：小分子有机染料与各种抗体相连接或特异的荧光标记物，研究各种目的蛋白需要对细胞进行固定等操作进展：直接在活体细胞内标记某种细胞器、核酸分子或某些离子的荧光标记物荧光蛋白：非侵入性的活体细胞成像荧光蛋白-目的蛋白融合表达：过量表达目的基因失活突变体（株）1）荧光标记物2）标记蛋白技术3）应用1）荧光标记物/荧光蛋白最早：藻胆蛋白（phycobiliproteins），蓝藻中提取的触角光合色素含有多种胆汁三烯生色基团，生色基团包裹在一种基质结构中，将它们的淬灭作用降至最小，因此这些藻胆蛋白的荧光亮度要比小分子荧光染料的亮度高出两个数量级。蛋白分子量200KD，限制了它们在细胞内的扩散，只能与抗体联用，在流式细胞或ELISA中用来检测细胞表面的蛋白质分子后来：维多利亚发光水母（Aequoreavictoria）中发现GFP，生物成像发生革命性改变，单独表达GFP或与其它蛋白融合表达荧光蛋白（GFP，RFP，YFP，CFP）大都来自海洋腔肠动物荧光蛋白发出的荧光一般对它们所处的生化环境都不太敏感，但酸性环境或变性剂的存在可以淬灭荧光/量子点（QuantumDot）（2000）无机纳米结晶体，冷光半导体纳米颗粒可根据其大小发出特定波长的荧光，具有非常高的消光系数（比小分子荧光基团和荧光蛋白高出10-100倍），量子产率也非常好典型的量子点都含有一个硒化镉（CdSe）或碲化镉（CdTe）核心，外面包裹一硫化锌（ZnS）外壳吸收波长范围覆盖从非常短的波长至略低于其发射波长的广阔范围，一束单波长激发光就可以让量子点达到多重发射量子点可以与抗体、抗生物素蛋白链菌素（streptavidin）等分子相连，但结合生物大分子的量子点体积过大（直径约10-30nm），阻碍它通过细胞膜结构，只能用于经透化处理的细胞或只能对胞外蛋白和可被细胞内吞的蛋白进行研究量子点的光稳定性使其能够反复成像，其大小和电子密度特性又使得它适合用于电镜研究在亲水的树枝状高分子聚合物中形成的金或银纳米点材