选考章末检测卷(十二)第十二章生物技术实践1．(2016·10月浙江选考，节选)(一)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：(1)配制LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加入________，灭菌备用。(2)配制尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗______________，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加入已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。(3)取适量含产脲酶细菌的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是________(A.10－5稀释液＋尿素固体培养基B．10－5稀释液＋LB固体培养基C．10－4稀释液＋尿素固体培养基D．10－4稀释液＋LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现________，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生________。(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是________________________________________________。【解析】(1)LB固体培养基的成分组成是：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、蒸馏水、琼脂。(2)尿素固体培养基的制备：先将含有酚红的固体培养基高压蒸汽灭菌，待冷却至60℃时，加入灭菌的尿素溶液，但要注意尿素溶液的加入需用到高压蒸汽灭菌的G6玻璃漏斗过滤，用其过滤的原因是孔径小、细菌不能通过，便于除菌。(3)LB固体培养基含有的营养元素全面，培养基上会有较多菌落，而尿素培养基只以尿素为唯一氮源，培养基上有较少菌落。尿素培养基上细菌产生的脲酶将尿素分解为NH3，使菌落周围的含酚红的培养基变成红色环。(4)制备固定化脲酶，可用吸附法将脲酶固定在石英砂上，用10倍体积的蒸馏水冲洗固定化酶柱，目的是除去未吸附的游离的脲酶。【答案】(1)琼脂(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过(3)A红色环氨(或NH3)(4)除去游离的脲酶2．下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：eq\x(A.配制培养基)→eq\x(B.灭菌)→eq\x(C.扩大培养（液体培养基）)→eq\x(D.划线分离和培养（固体培养基）)→eq\x(E.菌种保存)(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为________培养基。配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持__________________。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的________(填“前面”或“后面”)进行。(2)与C过程相比，D过程培养基中增加的物质是________。E过程所需的温度是________。(3)D过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是____________________的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进________。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是________。A．接种环和镊子B．三角瓶和广口瓶C．发芽培养基和生根培养基D．用于培养的幼茎和幼芽【解析】(1)LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离，培养基中加入氯化钠的作用是维持培养基的渗透压，培养基需调整好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调整，又会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂就成了固体培养基，培养好后的菌种应置于4℃冰箱中保存。(3)通过划线分离可使一个菌体繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中，若生长素多，有助于生根；若细胞分裂素多，则利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何的灭菌操作，否则会导致细胞死亡。【答案】(1)LB培养基的渗透压前面(2)琼脂4℃(3)(单)菌落消除污染杂菌(纯化菌种)(4)生根(5)D3．下图是利用土壤中L微生物提取脲酶，并进行纯化和固定化的实验流程。请回答下列问题：eq\x(\a\al(筛选产生脲酶,的微生物L))→eq\x(\a\al(产生脲酶的微生,物L的扩大培养))→eq\x(\a\al(脲酶的提,取、纯化))→eq\x(\a\al(脲酶的,固定化))(1)筛选微生物L时，用________作为培养基中的唯一氮源，加入________作凝固剂。接种时应采用________(方法)。(2)下