发育生物学实验实验一基因组DNA的提取实验二PCR及琼脂糖凝胶电泳检测实验三RFLP实验四RNA提取实验五TA连接实验六转化实验七质粒的提取、酶切鉴定一、加样器的使用及注意事项1、用途2、如何使用？练习：加样器读数为100，实际体积各为多少?2.3加样器使用步骤：1）选择加样器,观察读数,调节读数，吸头的安装要紧密。不要用手直接拿吸头，安上吸头后一定要再固定一下。2）吸取液体前，先打到第一挡。3）将吸头插入液面下适当深度，过深可能会腐蚀加样器,过浅可能会吸入空气。4）缓慢松开拇指,吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器;完全放开拇指后，停留约半秒钟,急于离开液面，容易吸入空气。5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去6）(吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损坏加样器！),贴容器内壁，将液体匀速打出，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内.1、打开电源2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。实验一、鱼类生物基因组DNA的提取、电泳高等生物的基因组相当宠大。鱼类细胞基因组约含１万个结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对鱼类细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的而研究的起点就是要获得纯度高－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－－断裂的基因组以便用于以后ＰＣＲ分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。掌握鱼类组织模板DNA的提取技术。学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和技术。五、实验步骤操作注意事项：1、离心时离心机内样品平衡后对称放置2、注意30ul、50ul加样体积准确。乙醇沉淀作用：a.阴离子型去污剂，溶解细胞膜、核膜上脂质成分b.使蛋白质变性c.将细胞膜、核膜破坏；对核酸酶有抑制作用重蒸酚:酚的作用是变性蛋白质，而对DNA结构没有影响。本身无色酚的氧化产物(如醌等,粉红色)破坏磷酸二脂键。重蒸酚是将酚中的酚的氧化产物去除。TE溶液:Tris-HCl10mM(pH:8.0)EDTA.Na21mM(pH:8.0)作用：提供略碱的pH值，保证DNA溶于水相。在酸性条件下，DNA分配于有机相。8-羟基喹啉：0.1%黄色酚相指示剂、抗氧化剂氯仿作用：a.氯仿的变性作用不如酚好，但与酚共同/交替使用可增强去蛋白效果；b.氯仿有加速有机相和水相的分离、去除植物色素和蔗糖、抑制核酸酶活性；延伸知识1、加入550ul(等体积)TE饱和酚,混匀1min.10,000rpm,2min。(注意抽取下层酚相;酚可腐蚀加样器等,加样器头用过即弃掉)(轻柔混匀，避免DNA链断裂;但是太轻又起不到变性蛋白的作用)2、将上层水相移至一新管中(要尽量抽尽，又不可吸起酚相)。加入500ul(等体积)酚/氯仿(已经配好，体积比1:1),同上条件混匀后离心。3、将上层水相移至一新管中。加入500ul(等体积)氯仿-异戊醇，同上条件离心、取上清。4、加入1/10体积（约30ul）醋酸钠于上清中充分混匀。5、加入2-2.5倍体积（约1ml）无水乙醇（通常加满小离心管），混匀后交给老师，（统一置）-20℃1h(或-70℃10min)。注意事项：1）本实验将用到的TE饱和重蒸苯酚、氯仿/异戊醇是有机试剂，比水的比重大，而DNA溶解在水里，我们总是取上清；2）在抽取完苯酚、氯仿等有机试剂尤其不能将加样器平放或倒置，以防液体导流损坏加样器，加完样后立即弃掉加样器头。3）基因组DNA由于太大，非常容易受机械剪切而断裂，因此，为了得到完整的基因组DNA，尽量不要多次进行物理性操作，如用加样器反复吹打等，有时需要将加样器头尖剪断，以防由于太细造成基因组DNA通过狭小通道而断裂。注意事项：双蒸水溶解沉淀要充分。实验第三部分、DNA质量检测－－－琼脂糖电泳1%琼脂糖凝胶电泳。在样品中加2～3ul6×上样液，混匀，加入上样孔内．电泳条件：100～110伏，30-40分钟。电泳结束后照像保存，结果分析。三、常用试剂线性DNA片断大小（kb）琼脂糖浓度（%）5–600.40.8–100.70.4–61.00.2–41.50.2–31.750.1–32.0五、电泳仪的使用方法六、预期结果如果是Smear带，说明所提基因组DNA的断裂现象严重。