C5aR稳定表达株的构建及其功能研究的中期报告为了研究C5aR的功能及其与其他受体的相互作用，我们构建了稳定表达C5aR的细胞株。在前期工作中，我们选择了人类表皮肺癌细胞系A549作为宿主细胞，将C5aR的编码序列克隆到表达载体pCDH中，并利用Lipofectamine3000将其转染至A549细胞中。转染后，利用筛选剂G418选出稳定表达C5aR的克隆细胞，并称之为A549-C5aR细胞。在中期报告中，我们进行了A549-C5aR细胞的鉴定及其功能研究。首先，我们通过Westernblot检测A549-C5aR细胞是否成功表达C5aR蛋白。结果显示，A549-C5aR细胞中存在明显的C5aR蛋白表达，而对照组A549细胞则没有表达C5aR蛋白。接着，我们评估了A549-C5aR细胞是否对C5a有反应。通过实时荧光定量PCR测定核因子κB（NF-κB）的基因表达及细胞酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌水平，发现C5a可以显著激活A549-C5aR细胞中的NF-κB及促进TNF-α的分泌，而对照组A549细胞则未见明显反应。这表明A549-C5aR细胞对C5a具有反应性，并能够在细胞水平上传递C5a的信号。进一步地，我们研究了A549-C5aR细胞的迁移能力。通过Transwell实验，发现与对照组相比，A549-C5aR细胞的迁移能力增强了约2倍，表明C5a的信号能够促进肺癌细胞的迁移和转移，进一步验证了C5aR在肿瘤发生和发展中的作用。综合以上结果，我们成功地构建了稳定表达C5aR的A549细胞株，并证明其对C5a有反应性，并且能够促进肺癌细胞的迁移。下一步，我们将继续研究C5aR在肺癌中的功能及其与其他受体的相互作用。