农药残留快速检测技术学习目标农药概况：农药检测现状：常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质食品安全快速检测农药残留快速检测方法：动物酶原：动物酶原：动物酶原：植物酶原：农药残留快检方法：超临界萃取（SCFE）超临界萃取（SCFE）超临界萃取（SCFE）超临界萃取（SCFE）3生物传感器法生物传感器分类：电化学生物传感器光学生物传感器其他生物传感器农药快速检测技术的现状：农药快速检测技术现状：3-1-1、酶抑制法1、速测卡法可单独使用也可与便携式农药残留速测仪配套使用。原理：利用速测卡中的胆碱酯酶(白色药片)可催化靛酚乙酸酯（红色药片）水解为乙酸和靛酚(蓝色），由于有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有强烈的抑制作用，因此，根据显色的不同，即可判断样品中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。样品处理分为整体测定法（浸提法）和表面测定法（粗筛法）便携式农药残留速测仪操作步骤（P22-23)结果判定3-1-1、酶抑制法2、分光光度法原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，抑制率与农药的浓度呈正比。本法利用酶催化乙酰胆碱水解，水解产物与显色剂反应生生黄色物质，该物质在412nm处有吸收，测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。3-1-2、分光光度法仪器：农药残留快速检测仪，电子天平，移液枪及配套管嘴，超声波提取仪，冰箱，恒温水浴。3-1-2、分光光度法试剂：①pH8.0缓冲溶液(提取液)：分别称取11.9g无水磷酸氢二钾和3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000mL蒸馏水中。②显色剂：分别称取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氢钠，溶解于20mL缓冲溶液中，4℃冰箱中保存。③底物：称取125mg碘化硫代丁酰胆碱，溶解于15mL缓冲液中，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。④丁(或乙)酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲液溶解，3min内的吸光度变化控制在0.4-0.8。摇匀后置4℃冰箱中保存备用。步骤：①样品处理样品→擦去表面泥土→剪成1cm见方碎片→取样品1g，(非叶菜类取2g)→加入10mL缓冲溶液→手摇振荡1-2min（或超声波振荡30s）→静置3-5min，待用。②对照溶液测试试管中加入100L酶液→100L显色剂→加入2.5mL缓冲溶液→摇匀于37℃放置10min→加入100L底物摇匀（反应并显色）→要立即放入比色池→记录反应3min时的吸光值A0。③样品溶液测试试管中加入100L酶液和100L显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值At。结果计算及判定结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。抑制率(%)=[(A0-At)/A0]×100当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，需要重复检验2次以上确定结果。同时可在实验室进一步确定具体农药品种和含量。注意事项：1、灵敏度高于速测卡法。现在市场上使用的该类仪器品种各式各样，有4通道、5通道、8通道、12通道的，大多是由分光光度计在结果计算功能上进行改进的专用农药残留快速检测仪。该类仪器使用简单方便，直接显现检测结果，配有数据管理软件，检测数据可上传，是目前省市一级对农药残留监督和县区一级日常检测的主要仪器。2、一个合格的试剂来说，它应适合于任意一款的检测仪器3、③试剂质量判别法：取玻璃试管，按试剂的加入顺序和加入量，加入底物，立刻观察溶液颜色变化情况。注意事项：具体是否能用，需待使用仪器测其空白样的活性才能确定。一般空白样3min的变化值为0.4-0.8较为合适。如果空白差值小于0.2，最好不用。空白差值在0.2~0.4，说明酶的活性较低，应当适当加大酶的用量，加大到200L，将空白差值调到0.4~0.6之间。同时有条件的可使用酶标仪来测定酶的活性，结果更准确。注意事项：④试剂的配制和保存：酶和底物的粉剂必须存放在冰箱的冷冻室(约-18℃)溶解后的酶溶液如暂时不用，要放在冷冻室内保存，用后的酶液放在冷藏室(0~5℃内)，7d内用完酶液做好不要反复冷冻，最多不超过2次，否则会影响酶的活性显色剂和底物液均保存在冷藏室(0~5℃)内提取液在常温下保存。注意事项：⑤叶菜类去烂叶、枯叶，并切成宽度为1cm左右的试样。块太大可能导致提取不完全，太小某些有颜色汁液会影响检测结果；豆类、块茎类取果皮至果肉1cm左右处的表皮试样；葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，处理这类样品时，可采取整株(体)浸提，避免次生