组织切片流程.doc
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常规石蜡包埋社团切片(常规切片)制备的操作流程及要求㈠社团块依序进行:①水洗,②脱水,③透明,④浸蜡,⑤包埋和⑥切片。㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物,必须专人管理,2m以内不患上有有焰的火,局部环境应有良好的透风和救火设施。㈢常规切片的手工操作(步骤次序和各步骤的持续时间)1.水洗:用水流冲洗已经固定的社团块30min。2.脱水(常温下)(1)乙醇-甲醛(AF)液固定60~120min(2)80%乙醇60~120min(3)95%乙醇Ⅰ60~120min(4)95%乙醇Ⅱ60~120min(5)无水乙醇Ⅰ60~120min(6)无水乙醇Ⅱ60~120min(7)无水乙醇Ⅲ60min[注意事项]①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5~10倍以上。③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个社团块脱水;加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时,提示需要更换)。⑤较大社团块的脱水时间长于较小者,应将两者分隔进行脱水。⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)。⑦丙酮脱水性能强,会使社团块过缩、硬脆,不宜用以替换无水乙醇。3.透明(1)二甲苯Ⅰ20min(2)二甲苯Ⅱ20min(3)二甲苯Ⅲ20min[注意事项]①二甲苯的容积应为社团块总体积的5~10倍以上。②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长(以防社团硬、脆),并依不同品类社团及其大小而异;社团出现棕黄或暗红色透明即可。③二甲苯应及时过滤、更换。④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时,常提示该社团的固定或脱水不充分,应查找原因并妥帖处理。4.浸蜡(1)石蜡Ⅰ(45~50℃)60min(2)石蜡Ⅱ(56~58℃)60min(3)石蜡Ⅲ(56~58℃)60min[注意事项]①熔化石蜡必须有专人负责,必须在熔蜡箱内或水浴中(70℃)进行,不患上用有焰的火加温。②熔蜡的容积应为社团块总体积的5~10倍以上。③社团块经二甲苯程度适当透明后方可转入浸蜡过程,应尽可能削减将透明后社团块表面的二甲苯带入熔蜡中。④浸蜡时间相宜,过短时浸蜡不充分(社团过软),过长时社团硬脆。⑤熔蜡应及时过滤、更换。5.包埋(1)先将熔化的石蜡倾入包埋生产模型中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的社团块,使社团块的最大面或被特别指定处的社团面向下埋入熔蜡中;应将社团块平正地置放于包埋生产模型底面的中央处;包埋于同一蜡块内的多块细小社团应彼此靠近并位于同一最简单的面上;腔壁、皮肤和黏膜社团必须垂直包埋(立埋)。(2)将与社团块相关的病理号小条置入包埋生产模型内熔蜡的一侧。(3)待包埋生产模型内的熔蜡表面凝固后,即将生产模型移入冷水中加速凝固。(4)从包埋生产模型中掏出凝固的包埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除社团块周围的过多石蜡(社团块周围保留1~2mm石蜡为宜)。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。(5)将病理号小条安稳地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。(6)把修整好的蜡块烙贴在撑持器上,以备切片。(7)使用包埋机的要领按有关厂商的说明书操作。(8)注意事项①应将社团块严格分件包埋。包埋时一定要首先认真核对社团块的病理号(包括亚号)、块数和取材医师对包埋面的要求,准确地包入相应的病理号小条。发生包埋差错时,必须立即与取材医师和病理科当班负责人取患上联系,及时处置。②必须严防各类异物污染,勿将无关社团(包括缝线、纸屑或其他异物(尤其是硬质异物)埋入蜡块内。③包埋过程要操作迅速,以免社团块尚未埋妥前熔蜡凝固。④包埋用的熔蜡应纯净,熔点相宜。浸蜡Ⅰ用软蜡(熔点为45~50℃),浸蜡Ⅱ、Ⅲ和包埋用蜡均用硬蜡(熔点为56~58℃)。⑤包埋用熔蜡使用前应将先静置沉淀、过滤。⑥熔蜡时不患上使用有焰的火,以防燃烧现象。包埋用熔蜡的温度应<65℃;包埋用的镊子不可加温太高,以免烫伤社团。6.切片(1)切片刀或一次性切片刀片必须锋利。使用切片刀时,必须精心磨备(在低倍目镜下确认刀刃完好口);使用一次性切片刀片时,应及时更新。(2)载玻片必须洁净、光明。(3)将切片刀或刀片安装在持刀座上(以15°为宜)。(4)将蜡块固定于持撑持器上,并调整蜡块和刀刃至适当位置(刀刃与蜡块表面呈5°夹角)。(5)细心移动刀座或蜡块撑持器,使蜡块与刀刃接触,旋紧刀座和蜡块撑持器。(6)修块(粗切):用右手匀速旋转切片机轮,修切蜡块表面至包埋此中的社团块完备地全数切到。修块粗切片的厚度为15~20?m。[注意:对于医嘱再次深切片(特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片),应尽量少修块,以尽量好地获患上有关病变的连续性。](7)调节切片厚度调节器(一般为4~6?m),进行切片,切出的蜡片应连续成带,完备完好