会计学胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因的克隆(kèlónꞬ)、表达及免疫原性研究猪传染性胸膜(xiōngmó)肺炎概况胸膜(xiōngmó)肺炎放线杆菌概述APP主要(zhǔyào)毒力因子溶血(rónꞬxuè)外毒素（Apx毒素）ApxⅠ的毒性最强，表观分子量为105-110kDa，具有很强的溶血活性和细胞毒性作用，分泌ApxⅠ的血清型有1、5、9、10和11。毒素Ⅰ型的操纵子包括：毒素激活基因apxⅠC，毒素结构蛋白基因apxⅠA，两个分泌基因apxⅠB和apxⅠD，其中apxⅠC负责编码毒素激活蛋白，apxⅠA编码毒素结构蛋白，apxⅠB和apxⅠD与毒素的分泌有关(yǒuguān)。apxⅠA基因的N端疏水区是ApxⅠ的免疫原区，apxⅠA基因的C端是Ca2+结合区只对毒素发挥毒性产生作用。ApxⅡ毒素的表观分子量为103kDa～105kDa，除血清型10以外(yǐwài)，其他血清型都可以分泌此毒素。ApxⅡ具有弱的溶血活性，它对肺泡巨噬细胞和嗜中性白细胞也有细胞毒性作用。ApxⅢ毒素的表观分子量为120kDa，是由2、3、4、6、8型APP菌分泌的，ApxⅢ没有溶血活性，但对肺泡(fèipào)巨噬细胞和嗜中性白细胞有很强的细胞毒性作用。ApxⅣ毒素是新近发现的。研究人员发现任何血清型都能在体内分泌ApxⅣ毒素蛋白，但体外培养的细菌却不能分泌该毒素。当apxⅣA与表达载体上的开放阅读框1（ORF1）在大肠杆菌中表达时，它有微弱的溶血活性和协同(xiétóng)溶血作用（cAMP）。不同Apx毒素(dúsù)的生物学特性Apx操纵子基本(jīběn)结构胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因(jīyīn)的克隆与原核表达引物设计(shèjì)apxⅠA基因(jīyīn)的PCR扩增结果重组质粒pTA的PCR和酶切鉴定(jiàndìng)结果目的片段(piànduàn)序列测定重组表达(biǎodá)质粒pETA的PCR和酶切鉴定结果不同时间(shíjiān)诱导表达的SDS-PAGE电泳图不同浓度(nóngdù)IPTG诱导表达的SDS-PAGE电泳图不同温度IPTG诱导(yòudǎo)表达的SDS-PAGE电泳图重组质粒pETA表达产物Westernblotting检测(jiǎncè)结果裂解(lièjiě)后SDS-PAGE电泳图apxⅠA表达蛋白(dànbái)的免疫原性研究三种蛋白(dànbái)纯化后的SDS-PAGE电泳图三种(sānzhǒnꞬ)蛋白的Westernblotting检测结果APP10型菌所提取(tíqǔ)的天然ApxⅠ免疫原浓度(nóngdù)的测定结果实验(shíyàn)动物分组免疫(miǎnyì)程序与剂量小鼠免疫(miǎnyì)后的抗体效价APP10型半数(bànshù)致死量（LD50）的确定APP1型半数(bànshù)致死量（LD50）的确定攻毒结果(jiēguǒ)结论3.纯化(chúnhuà)了apxⅠA、apxⅠAN和apxⅠAC三种表达蛋白，apxⅠA具有与天然ApxⅠ毒素类似的免疫原性，且N端免疫原性显著高于C端。4.提取了天然的ApxⅠ毒素蛋白，试验证明其具有免疫原性和交叉保护力。内容(nèiróng)总结