实验五食品中产毒霉菌的分离与鉴定二、实验原理一、实验目的二、实验原理曲霉属：黄曲霉、赭曲霉、杂色曲霉、烟曲霉、构巢曲霉和寄生曲霉等；青霉属：岛青霉、桔青霉、黄绿青霉、扩张青霉、圆弧青霉、皱折青霉和荨麻青霉等；镰刀菌属：犁孢镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、三线镰刀菌、雪腐镰刀菌、粉红镰刀菌、禾谷镰刀菌等；其它菌属：有绿色木霉、漆斑菌属、黑色葡萄状穗霉等。黄曲霉黑曲霉烟曲霉青霉菌镰刀菌属本属的产毒霉菌主要包括禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、雪腐镰刀菌、三线镰刀菌、梨孢镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和木贼镰刀菌等。这些霉菌的代谢产物为单端孢霉烯族化合物、玉米赤霉烯酮和丁烯酸内酯等。1、营养菌丝体气生菌丝发达高0.5～1.0cm或较低为0.3～0.5cm，或更低为0.1～0.2cm；稀疏的气生菌丝，甚至完全无气生菌丝而由基质菌丝直接生出黏孢层，内含大量的分生孢子。2、产孢结构可产生大、小两种分生孢子。小型分生孢子通常假头状着生,较少为链状着生,或者假头状和链状着生兼有。小型分生孢子生于分枝或不分枝的分生子梗上,形状多样,卵形、梨形、椭圆形、长椭圆形、纺锤形、披针形、腊肠形、柱形、锥形、逗点形、圆形等。1～2(3)隔,通常小型分生孢子的量较大型分生孢子为多。大型分生孢子产生在菌丝的短小爪状突起上或产生在分生孢子座上,或产生在粘孢团中;大型分生孢子形态多样,镰刀形、线形、纺锤形、披针形、柱形、腊肠形、蠕虫形、鳗鱼形,弯曲、直或近于直。顶端细胞多种形态,短啄形、锥形、钩形、线形、柱形,逐渐变窄细或突然收缩。链格孢霉菌瓶霉菌三、实验器材四、实验步骤1、检样的前处理及梯度稀释方法二点种法3.接种与培养用无菌镊子将已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板或PDA培养基平板上(粮粒的一部分插入培养基中)，小粒样品如大米接种10粒／皿，大粒的样品(玉米、大豆等)接种5粒，每份样品共接种5个平板,将种有样品的平皿置25～28℃孵箱培养5～7天，培养后期应每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。4、镜检与初分离镜检用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1～2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用二支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖上盖玻片，先在低倍镜下找到培养物，再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。采用点植法选择适合的琼脂平板，左手拿起平板底，使培养基朝下，右手持接种针，蘸取少量孢子点种在培养基中心点或成三角形的三分点，然后盖上平皿盖，始终保持平板底朝上，放于孵箱中培养；这种方法可避免霉菌孢子散落在培养基上，使菌落生长一个或三个扇形的典型菌落，便于观察。（二）产毒霉菌的鉴定(3)菌落的质地由于菌丝的长短和疏密，以及孢子的有无和多少，菌落的质地可为绒状，絮状，绳状和束状。(4)菌落的表面疏松或致密；平坦、凹陷或隆起，有无皱褶，有无放射状或同心环状的沟纹，边缘是否整齐等。(5)渗出物有的菌种常常在菌落表面出现的带颜色的似液体物即为渗出物，记录其色调和分泌的量。(6)其他是否出现除霉味以外的其他特殊的气味。2、观察各产毒霉菌的镜下特征将生长茂盛的菌丝用乳酸石炭酸棉蓝染液做压滴标本镜检以鉴定到属或种。主要镜检以下特征：（1）各产毒霉菌的菌丝结构，有无隔膜；（2）各产毒霉菌产孢结构的形态特征；（3）各产毒霉菌分生孢子的形态及排列等特征。五、实验结果一、实验目的二、实验原理1、营养菌丝体气生菌丝发达高0.5～1.0cm或较低为0.3～0.5cm，或更低为0.1～0.2cm；稀疏的气生菌丝，甚至完全无气生菌丝而由基质菌丝直接生出黏孢层，内含大量的分生孢子。2、观察各产毒霉菌的镜下特征将生长茂盛的菌丝用乳酸石炭酸棉蓝染液做压滴标本镜检以鉴定到属或种。主要镜检以下特征：（1）各产毒霉菌的菌丝结构，有无隔膜；（2）各产毒霉菌产孢结构的形态特征；（3）各产毒霉菌分生孢子的形态及排列等特征。