实验动物的一般操作技术一、目的和意义毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对实验动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量——反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。通过本次实习学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取、染毒方法和生物材料的采集等技术。二、内容（一）健康动物的选择无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。健康动物检查时要求达到：外观体型丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。选择时重点检查以下项目：1.眼睛明亮、瞳孔双侧等圆，无分泌物。2.耳耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。3.鼻无喷嚏，无浆性粘液分泌物。4.皮肤无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。5.颈部要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。6.消化道无呕吐、腹泻、粪便成形，肛门附近被毛洁净。7.神经系统无震颤、麻痹。若动物（大鼠、小鼠）出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应放弃该动物。8.四肢及尾四肢、趾及尾无红肿及溃疡。（二）实验动物的性别鉴定动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这可能与性激素、肝微粒体羟基化反应有关，也随受试物而异。因此，要根据实验要求选择性别，一般实验如对性别无特殊要求者，宜选用雌性动物各半。1.大鼠、小鼠主要依肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄性，小者为雌性。雌性生殖器与肛门之间有一无毛小沟，距离较近。雄性可见明显的阴囊，生殖器突起较雌鼠大，肛门和生殖器之间长毛。另外成年雄性卧位可见到睾丸，雌性在腹部可见乳头。（三）实验动物的抓取方法正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行。1.小鼠的抓取方法首先用右手从笼盒内抓取鼠尾提起，注意不可抓尾尖（见图A），放在鼠笼盖或实验台上向后拉（见图B），在其向前爬行时，迅速用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤（见图C），将鼠体置于左手中心，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可（见图D）。（四）实验动物称重、编号、标记方法1.称重大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。根据实验的不同要求，选择一定数量的大、小鼠，体重要求在同一组内、同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，不同组间同性别动物体重均值差异应小于5%。2.编号动物编号方法有多种。大、小鼠常用方法如下；（1）染色法:染色法是用化学剂在动物身体明显部位如皮毛、四肢等处进行涂染，或用不同颜色等来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。常用的标记液有苦味酸酒精饱和溶液（黄色）。标记时，用标记笔取上述溶液，在动物体表不同部位涂上斑点，以示不同号码。一般把涂在右前肢上的记号为1号，按顺时针方向，依次后右肢为2号，左后肢为3号，左前肢为4号，头部为5号（见图2-7A），6-10则由以上5个基本数复合而成，比如6号则是在头部和右前肢标记各一（见图2-7B），7号为在头部和右后肢标记各一，以此类推。在动物的背部划一长条为10号。10号以上均由上述复合方法进行编号。例如：16号是在头部、右前肢、背部均有标记（见图2-7C）。（2）剪耳法:在耳朵不同部位剪一小孔代表某个号码。常以右耳代表个位，左耳代表十位。或与染色法配合使用，右耳剪孔代表十位，左耳代表百位。（3）烙印法：是用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的黑墨在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。（4）号牌法：用金属的牌号固定于实验动物的耳上，大动物可系于颈上。（五）实验动物的随机分组方法为了得到客观的计量——反应关系，应将一群动物按统计学原则随机分配到各个试验组中。可按随机数字表方法进行随机分组（见随机数字表法分组说明）。但小动物的年龄和体重呈正相关，而年龄又与毒物代谢动力学密切相关。为了减少实验各组动物间的体重差异，在实际工作中常采用体重均衡法（简化分层随机法）进行分组，即将同一性别的动物按体重大小顺序排列，分组时由体重小的到大的，依次随机分配到各组。一种性别的动物分完以后，再分配另一种性别的动物。各组雌雄性动物的数目应尽可能相等。体重均衡法分配方法如下：第一步将动物按体重分组以急性毒性实验时使用小鼠为例，一般按照18~g,19~g,20~g,21~g,22~g,23~g,24~g分为7组，所有动物称重后放入相应的体重组中。第二步将同一体重段的动物均匀分配至各试验组中从最低体重组中随意取出一只动物放入实验组第一组，第二只动物放入第二组，以此类推，直到该组动物用完。再从下一体重组中随意取出