饲养细胞的制备3010.06.30在细胞融合后选择性培养的过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其它活细胞使之繁殖，这种被加入的活细胞称之为饲养细胞（FeederCells）饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了，一般认为它们可能释放非种属特异性的生长刺激因子，为杂交瘤细胞提供必要的生长条件；也可能是为了满足新生的杂交瘤对细胞密度的依赖性。常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹水巨噬细胞。其中小鼠的腹腔巨噬细胞来源及制备较为方便，且有吞噬清楚死亡细胞的作用，因此使用最为方便。制备方法：1、小鼠（一般选取经产母鼠）脱颈椎致死，注意断颈椎时尽量减少对腹腔的压迫，避免损伤腹腔内血管，以防饲养细胞内含有大量血细胞。2、将小鼠浸泡于75%酒精中5—分钟，然后手提住小鼠尾巴，上下于酒精中涮洗数次。置于超净台无菌平皿中。3.用无菌剪镊从后腹剪开皮肤，沿两侧剪开皮肤，暴露腹部，注意不要损伤腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。4.用注射器吸取6-8ml的不完全培养基注射入腹腔，注意注射时用镊子提起腹膜，避免针头刺到肠管等腹腔脏器。5.用棉球轻轻按摩腹部一分钟，吸出注入的培养液。6.800-1000r/min离心5-10min，弃去上清。若腹腔血管损伤，沉淀中可见有红细胞。7.用5mlHAT培养基悬浮细胞根据细胞计数结果，补加HAT培养基，使细胞浓度达2×105/ml。（一般情况下一只经产母鼠可铺2-3块96孔板。）通常对巨噬细胞来说，96孔板每孔需要2×104个细胞，24孔板需105个细胞。每只小鼠可采-5×106个细胞，因此一只小鼠可供两块96孔板饲养细胞。8.将上述细胞悬液加入96孔板，每孔0.1ml,37℃,6%CO2的培养箱培养。