生物化学实验报告——蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法）蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法）【实验目的】熟悉并掌握用Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。【实验原理】蛋白质（或多肽）分子中含有酪氨酸或色氨酸，能与Folin-酚试剂起氧化还原反应，生成蓝色化合物，蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比，可通过绘制标准曲线，用比色法测定蛋白质浓度。【实验试剂】1.标准酪蛋白200ug/ml2.Folin-酚乙液（原液与水按1:1比例混合，实验室已准备）3.Folin-酚甲液（实验室已准备）A液4%Na2CO3:0.2%NaOH=1：1B液1%CuSO4:2%酒石酸钾钠=1：1A：B=50：1混匀4.样品血清（稀释200倍）【实验步骤】准备9支干净的试管，按表一顺序加入试剂表一序号试剂123456789标准蛋白/ml00.20.40.60.81000血清（稀释200倍）/ml0000000.20.20.2水/ml10.80.60.40.200.80.80.8各试管中加入5mlFolin-酚甲液，用旋涡摇匀器充分混合均匀，静置水浴（37度）10min。各试管中加入0.5mlFolin-酚乙液，用旋涡摇匀气充分混合均匀，静置水浴（37度）30min。使用分光光度计，用640nm波长进行比色。【实验结果】表二各试管中标准蛋白浓度和OD值序号123456789标准蛋白浓度ug/ml04080120160200///ODλ=640nm00.090.1390.2060.2610.3090.1770.1770.17A、B、C三支试管中液体在640nm处OD值的平均值为ODλ=640nm=（0.177+0.177+0.17）/3=0.175如图一蛋白质浓度的标准曲线，当OD=0.175时，标准蛋白质浓度为109.375μg/ml，则所测样品血清的浓度为109.375μg/ml，经转化，样品血清浓度为10.9375g/100ml图一蛋白质浓度的标准曲线【思考讨论】结果分析，三组平行实验最终测得的OD值理论上是一样的，但我们的实验结果中有一个数值偏离较大，给最终的实验结果带来误差。分析原因：①可能是因为加样的误差造成的三个试管中卵清蛋白的浓度不同，最终影响测定结果②可能是因为没有充分混匀，导致每个试管中的浓度不同③可能是因为分光光度计自身误差造成的。实验注意事项：在使用分光光度计时，拿比色皿要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污导致测量值不准确。在比色皿中装入的液体量大约是比色皿体积的三分之二，太多容易洒出来，给测量造成不便，太少也容易造成测量的不准确。一定要注意实验时间，因为溶液的光密度值随时间会发生变化，时间太长会导致测量误差。