提取原理与方法ppt.pptx
上传人:王子****青蛙 上传时间:2024-09-14 格式:PPTX 页数:34 大小:250KB 金币:10 举报 版权申诉
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提取原理与方法DNA提取得几种方法DNA提取得几种方法基因组DNA-CTAB法CTAB提取缓冲液得经典配方CTAB提取缓冲液得改进配方PVP(聚乙烯吡咯烷酮)CTAB法流程图SDS法原理10SDS法流程图(以动物组织为例)基因组DNA-其它方法基因组DNA-其它方法基因组DNA-其它方法质粒DNA-碱裂解法质粒DNA-碱裂解法SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1得成分及作用质粒DNA-煮沸法细胞器DNA-差速离心法DNA提取得基本步骤材料准备严谨性质粒与松弛性质粒细胞裂解核酸分离、纯化核酸分离、纯化多糖得去除:高盐法:用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积得5MNaCl,高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量得氯苯(1/2体积),氯苯可以与多糖得羟基作用,从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500μLDNA液中加入200μl20%PEG8000(含1、2MNaCl),冰浴20min。多酚得去除:在抽提液中加入防止酚类氧化得试剂:β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合得试剂:如PVP、PEG(聚乙二醇),它们与酚类有较强得亲与力,可防止酚类与DNA得结合核酸沉淀、溶解猕猴桃DNA提取实例猕猴桃基因组DNA