专题土壤中分解尿素的细菌的分离和计数内容纲要课题背景（1）自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对的要求，到相应的环境中去寻找。（2）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。菌株：纯且活状态所保存的菌种。研究思路（二）统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌（二）统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（3）统计原则①选30∼300个菌落的平板统计②每个稀释度取3个平板取其平均值大家学习辛苦了，还是要坚持例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？研究思路2、显微镜直接计数研究思路研究思路实验过程实验过程（三）微生物的培养与观察1、接种：用适当的稀释液作涂布平板2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d;放线菌:25∼28℃,5∼7d;霉菌:25∼28℃,3∼4d.3、观察：a.每24h统计一次菌落数目b.以“稳定菌落”为观察对象（四）鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性(1)作样品系列稀释液(2)用适当的稀释液涂布平板在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。特别提示(1)不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同，可以作为菌种鉴定的重要依据。(2)进行活菌计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)选择培养基一般只生长具有特定代谢特性的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。【例1】尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题。(1)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_______和_____，实验需要振荡培养，原因是______________。(3)转为固体培养基时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。(4)下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是________；需要消毒的是________。(填序号)(5)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有______。(填序号)①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照思维导图：深度剖析(1)培养基中加入尿素的目的是筛选尿素细菌。(2)尿素可为尿素细菌提供氮源，震荡可为目的菌株提供氧气。(3)在固体培养基中接种常用稀释涂布平板法和平板划线法。(4)操作器械需灭菌，操作者双手需消毒。(5)土样不同、培养基污染、操作失误均可能导致计数误差。答案(1)目的菌选择(2)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(3)稀释涂布平板(平板划线)(4)①和②③(5)①②③[思维拓展](1)利用选择培养基设计实验分离纯化微生物。①真菌：用含青霉素的培养基分离。②金黄色葡萄球菌：用含高浓度食盐水的培养基分离。③固氮微生物：用无氮培养基分离。④自养型微生物：用含无机碳源的培养基分离。⑤光合细菌：用含无机碳源的培养基在无氧而有光照的环境中分离。⑥厌氧型和兼性厌氧型微生物：用普通培养基在无氧条件下分离。⑦乳酸菌：用乳酸含量较高，pH较低的普通培养基分离。⑧假单胞杆菌：用石油作为唯一碳源的培养基分离。(2)微生物分离与计数中两种对照组的作用：①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的