会计学一、课题背景1、实例：要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；方法：⑴抑制大多数微生物的生长⑵造成有利于该菌生长的环境结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板划线法或稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。15.0g①从物理性质看此培养基属于培养基，是由于加入了凝固剂。②从功能上看属于培养基，此培养基的只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培养基上生长，此培养基属于培养基。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2）常用方法：稀释涂布平板法。想一想，如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？实例分析P22注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布三个或三个以上的平板，培养统计菌落数，计算出菌落平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。④恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右时为最好。2、显微镜直接计数：将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按1：1均匀混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。举例：已知红细胞浓度为M个/mL，从体积为NmL的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，大肠杆菌Y个，求NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X是多少？2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是()A.菌落数量最多的平板B.菌落数量最少的平板C.菌落数量适中的平板D.取若干个平板菌落数量的平均值设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。教材提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种：一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？方案一：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。教材提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种：一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。实验设计：二实验设计与操作菌落计数（一）土壤取样◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？（四）取样涂布3.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板。B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上。C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时。D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数。4.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是()A.细菌个体小，真菌个体大B.细菌易稀释，真菌不易稀释C.细菌在土壤中数量比真菌多D.随机的，没有原因（五）微生物的培养与观察并计数微生物的培养与观察/〖注意〗研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被致病的微生物感染，实验后，一定要洗手。1、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性2、伊红—美蓝培养基：鉴定大肠杆菌。原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→菌落呈深紫色并带有金属光泽。1.实验设计和操作提示样品的稀释和涂布培养计数三、操作提示（二）如何判断样品的稀释操作是否成功？1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质2.使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和