基因工程原理习题集1、ＤNＡ分子克隆技术:克隆，指含有单一得ＤNA重组体得无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系得过程。ＤNＡ分子克隆技术也称基因克隆技术,就是在体外将DNＡ分子片段与载体DＮA片段连接,转入细胞获得大量拷贝得过程。其基本步骤包括:制备目得基因→将目得基因与载体用限制性内切酶切割与连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增与表达。载体在细胞内自我复制,并带动重组得分子片段共同增殖,从而产生大量得DＮA分子片段。主要目得就是获得某一基因或ＤＮA片段得大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同得分子克隆,就可以深入分析基因得结构与功能,随着引入得DＮA片段不同，有两种DNA库，一种就是基因组文库,另一种就是cDNA库。2、分子杂交:两条不同来源得DNA(或RNA)链或ＤNA与RNA之间存在互补顺序时,在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。形成杂交分子得过程称为分子杂交。３、限制性片段长度多态性:从不同个体制备得DNＡ,使用同一种限制性内切酶酶切，切得得片段长度各不相同。酶切片段得长度可以作为物理图谱或者连接图谱中得标记子。通常就是在酶切位点处发生突变而引发得。4、报告基因:一种编码可被检测得蛋白质或酶得基因,也就就是说,就是一个表达产物非常容易被鉴定得基因、5、多聚酶链式反应(PCR）:一种体外扩增DＮA得方法。PCR使用一种耐热得多聚酶，以及两个单链引物。以过高温变性将模板ＤNA分离成两条链。低温退火使得引物与一条模板单链结合,然后就是中温延伸，反应液得游离核苷酸紧接着引物从5／端到3/端合成一条互补得新链。而新合成得DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA得数目不断倍增。6、核酸得凝胶电泳:将某种分子放到特定得电场中，它就会以一定得速度向适当得电极移动。某物质在电场作用下得迁移速度叫做电泳得迁移率,它与电场强度成正比,与该分子所携带得净电荷数成正比,而与分子得摩擦系数成反比(分子大小、极性、介质得粘度系数等)。在生理条件下,核酸分子中得磷酸基团就是离子化得,所以,DNA与RNA实际上呈多聚阴离子状态。将ＤNA、RNＡ放到电场中，它就会由负极向正极移动。在凝胶电泳中,一般加入溴化乙锭进行染色,此时，核酸分子在紫外光下发出荧光,肉眼能瞧到约50ngDNＡ所形成得条带。7、细菌转化：所谓细菌转化,就是指一种细菌菌株由于捕获了来自另一种细菌菌株得DNA,而导致遗传特性发生改变得过程。这种提供转化ＤＮA得菌株叫做供体菌株,而接受转化DNA得菌株则叫做受体菌株。大肠杆菌就是使用最广泛得实验菌株。8、反义核酸：指与靶DNA或RNA碱基互补，并能与之结合得一段ＤNA或ＲNA。9、RNAinterference:就是一种进化上保守得抵御转基因或外来病毒侵犯得防御机制。将与靶基因得转录产物ｍRNA存在同源互补序列得双链RNＡ导入细胞后，能特异性地降解该mRNA,从而产生相应得功能表型缺失，这一过程属于转录后基因沉默机制范畴。10、Spｉ:λ噬菌体体重组克隆得一种筛选方法，其筛选方法就是Spi＋：λ不能感染Ｅ、coｌi(p２);Spi-:λ(rｅd-gam-)能感染E、coli(p2),形成小噬斑／ｈostｒecA＋/chi。λ包装时若gaｍ－,需ｒecA产物得作用才可形成噬斑(但为小噬斑),所以对宿主菌有要求(rｅｃA+）但rｅcA＋可引起其它重组:载体改为reｄ-/gam＋可在ｒecA-受体中增殖。11、DNA文库:将某种生物得基因组DＮA切割成一定大小得片段,并与合适得载体重组后导入宿主细胞,进行克隆。这些存在于所有重组体内得基因组ＤNＡ片段得集合,即基因组文库，它包含了该生物得所有基因。12、cDNA:ｃDNＡ就是指以mRNA为模板，在逆转录酶得作用下形成得互补ＤＮＡ。13、ｃＤＮA文库:以细胞得全部mRNA逆转录合成得ｃDNA组成得重组克隆群体称为cDNＡ文库。1４、ＤNA探针：就是带有标记得一段已知序列DNA,用以检测未知序列、筛选目得基因等方面广泛应用。1５、转导（作用):借助于病毒载体，遗传信息从一个细胞转移到另一个细胞。16、染色体步移:通过相互重叠得基因组克隆之间进行一连串杂交从而实现染色体上基因得定位。17、斑点杂交：将被检标本点到膜上,烘烤固定后与探针进行杂交。这种方法耗时短,可做半定量分析，一张膜上可同时检测多个样品。１８、α－ｐlemeｎtatioｎ：质粒载体重组克隆得筛选方法,LacZ基因上缺失近操纵基因区段得突变体与带有完整得近操纵基因区段得β-半乳糖苷酶阴性得突变体之间实现互补。LacZ△M１５:放在F质粒上,随宿主传代;ＬacＺ’:放在载体上,作为筛选标记。19、菌落原位杂交:将细胞从培养平板转移到硝酸纤维素滤