H5N1亚型禽流感病毒PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶的中期报告.docx
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H5N1亚型禽流感病毒PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶的中期报告该中期报告主要针对H5N1亚型禽流感病毒PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶的研究工作。表达方面,我们采用了大肠杆菌作为宿主细胞,利用pET28a载体将目标蛋白的编码序列导入到细胞中进行表达。经过多次实验优化,我们发现在宿主菌可溶性蛋白的表达情况下,添加1mM的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达时间为4小时时,便能得到较高的表达量。纯化方面,我们采用了一系列的离子交换柱和凝胶过滤柱,剔除了大部分杂质,得到了高纯度的目标蛋白。同时,我们也采用Westernblotting和SDS-PAGE等技术对纯化后的样品进行了验证。结晶方面,我们使用了热裂解法、超声波分散法和薄层扫描法等方法对目标蛋白进行了初步的结晶实验,但尚未得到良好的晶体。总的来说,我们的工作已经初步完成了H5N1亚型禽流感病毒PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶的研究,并且得到了一定的进展,但还需进一步优化实验方案,提高结晶的成功率。
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