作者：江红霞，季本华，朱素琴【摘要】目的优化植物超氧化物歧化酶（SOD）的制备工艺。方法用热变性沉淀、等电点沉淀，45%，90%硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析，冷冻浓缩干燥等方法，从黄瓜中制备SOD，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量，用NBT光还原法测定SOD活性。结果SOD酶比活为89.2381U·mg-1，回收率为18.41%，提纯倍数为11.02倍。结论该工艺简便高效地从植物中提纯超氧化物歧化酶，可用于生产实际。【关键词】超氧化物歧化酶；制备工艺；SOD酶活力Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractiontechnologyofsuperoxidedismutasefromplants.MethodsWeextractedSODfromthecucumberbyheattreatment,isoelectricfraction,ammoniumsulfatefractionationandionexchangechromatography,CoomassiebrilliantblueG-250wasadoptedtodeterminethecontentoftheproteinandNBT-reductionwasusedtomeasuretheSODactivity.Meanwhile,thepurifiedsubstancewasidentifiedasSODbythepolyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)andSODactivitystaining.ResultsSODhadaspecificactivityof89.2381U·mg-1.Theyieldratewas18.41%,andthemultiplicationwasas11.02times.ConclusionThetechnologyisanextractiontechnologyofsuperoxidedismutaseformplantssimplyandefficientlyanditwillbeagoodreferencefortheproduction.Keywords：Superoxidedismutase(SOD)；Extractiontechnology；ActivityofSOD超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)，作为一种专一清除生物体内超氧阴离子自由基(O2-·)的酶，催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，减少超氧阴离子自由基对生物体的毒害。目前，人们已从动物、植物和微生物体内分离得到，并且通过多种方法应用到实际中［1］，如应用到医药方面、食品、农业、化妆品及人和动植物许多疾病的监测方面等。植物超氧化物歧化酶的制备工艺，其主要目的是纯化植物中的SOD，最大限度地清除杂蛋白，因此，常用的方法主要有热变性法、等电点沉淀法、盐析法、有机溶剂沉淀法、超滤法、层析法等［2］。而本文主要探究超氧化物歧化酶的制备工艺，比较几种常用工艺，热变性法和等电点沉淀法简单，不需加其他试剂，但不能大幅度提高SOD的比活；盐析法有利于保持蛋白质的生理活性，但分辨率低［3］；离子交换层析主要用于高纯度的SOD精品的制备，处理量小。本研究将几种简单工艺相结合，扬长避短，找出一套既简便又能有效提高SOD纯化倍数的方法。1材料与方法1.1材料与试剂黄瓜；氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、甲硫氨酸、二乙基氨基乙基纤维素(DEAE)、四甲基乙二胺(TEMED)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、丙烯酰胺(国药集团化学试剂有限公司)、甲叉双丙烯酰胺(中国医药集团上海化学试剂公司)等化学试剂均为分析纯；标准蛋白采用上海生物化学试剂公司产的牛血清白蛋白；考马斯亮蓝G-250(上海化学试剂分装厂)。1.2仪器722光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；DYY-Ⅲ2稳压稳流电泳仪(北京市六一仪器厂)；电热恒温水浴锅JK-S26型(上海华联医疗器械有限公司)；高速冷冻离心机D-37520(OsterodeKendroLaboratoryProducts)；LGJ-10冷冻干燥机(军事医学科学院实验仪器厂研制，北京松源滑行科技发展有限公司制造)；HD-3紫外检测仪(上海沪西分析仪器厂)；DHL-A电脑恒流泵(上海沪西分析仪器厂)；DBS-100电脑全自动部分收集器(上海沪西分析仪器厂)。1.3方法将黄瓜用清水洗净，称取100g，以1.5∶1比例［3］加入pH7.8，0.05mol/L的磷酸盐缓冲液150ml，先加75ml磷酸盐缓冲液和少许石英砂，用高速组织捣碎机充分搅碎，在12000r/min，4℃离心40min，使悬浮物完全沉淀，取沉淀再加