第三章吸附层析层析又称为色谱或色层，是俄国植物学家茨维特在分离植物色素时发现并最先应用的一种分离纯化方法。其总的原理是根据各种被分离组分在固定相和流动相的分配系数不同达到分离的目的层析法根据层析类型分，可分为柱层析、纸层析和薄层层析；根据具体分离原理分，可分为吸附层析、分配层析、疏水层析、离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤层析等具体层析方法吸附层析（absorptionchromatography）又称色层法或色谱法；是根据各种被分离组分在固定相和流动相的分配系数不同达到分离的目的一类分离纯化方法目的层析方法的类型第一节吸附柱层析吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相制备成色谱柱，以有机溶剂或缓冲液为流动相，用于分离纯化的一种层析方法一、常用术语3．层析以基质为固定相(柱状或薄层状)，以液体或气体为流动相，使有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附或交换，最终使混合物得到分离的过程5．床体积(Vt)是指膨胀后的基质在层析柱中所占有的体积(Vt)。它是基质的外水体积(Vo)和内水体积(Vi)以及自身体积(Vg)的总和，详见图3-1，即V=Vo+Vi+Vg6．洗脱体积(Ve)是指某一成分从柱顶部到底部的洗脱液中出现浓度达到最大值时的流动相体积。用Ve表示(见图3-7中OB)7．外水体积(Vo)外水体积指基质颗粒之间体积的总和8．内水体积(Vi)内水体积是指基质颗粒内部体积的总和9．基质体积(Vg)基质体积是指基质自身所具有的体积。Vo、Vi和Vg都是随着床体积和基质性质变化而变化的10．膨胀度在一定溶液中，单位重量的基质充分溶胀后所占有的体积（用Vβ表示）。即每克溶胀基质所具有的床体积一般亲水性基质的膨胀度比疏水性的大11．分配系数是指一组分在固定相与流动相中含量的比值，常用K表示12.迁移率指一组分在相同时间内，在固定相移动的距离与流动相移动距离之比值。常用Rf表示二、基本原理三、吸附剂（二）吸附剂的性质使用HA作为固定相基质时应注意四、洗脱剂五、层析柱的制备和层析操作（三）装柱（四）上样和洗脱加样操作示意图（五）柱子再生(1)纯化生命物质[72]：(2)分离蛋白质的亚基[114]第二节薄层层析薄层层析(thinlayerchromatography，TLC)是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法1．展层时间短，薄层层析分离混合物一般仅需15~60min2．设备简单、操作方便，既适用于分析，也适用于制备3．温度变化和溶剂饱和程度对Rf值影响较小4．可使用腐蚀性显色剂(用淀粉作黏合剂和葡聚糖凝胶作固定相的薄板除外)5．灵敏度高第三节聚酰胺薄膜层析聚酰胺薄膜层析是1966年之后发展起来的一种层析方法。特别应指出的是，用此法分析氨基酸衍生物DNP-氨基酸、PTH-氨基酸、DNS-氨基酸以及DABTH-氨基酸1）时，具有灵敏度高、分辨力强、展层迅速和操作简便等优点，它超过了这类化合物过去使用的纸层析、纸电泳和薄层层析(茚三酮法)等方法1．用DNS—氨基酸的聚酰胺薄膜层析鉴定肽N末端2．用DABTH—氨基酸的薄层法分析蛋白质序列一、常用术语三、吸附剂使用HA作为固定相基质时应注意1．展层时间短，薄层层析分离混合物一般仅需15~60min2．设备简单、操作方便，既适用于分析，也适用于制备3．温度变化和溶剂饱和程度对Rf值影响较小4．可使用腐蚀性显色剂(用淀粉作黏合剂和葡聚糖凝胶作固定相的薄板除外)5．灵敏度高