现代生化分离技术SeparationMethodsinBiochemistry第三章沉淀技术第一节概述3.1.2沉淀的类型：沉淀法是最古老的分离和纯化生物物质的方法，目前仍广泛应用在工业上和实验室中。由于其浓缩作用常大于纯化作用，因而沉淀法通常作为初步分离的一种方法，用于从去除了菌体或细胞碎片的发酵液中沉淀出生物物质，然后再利用色层分离等方法进一步提高其纯度。沉淀法由于成本低、收率高、浓缩倍数高可达l0-50倍和操作简单等优点，是下游加工过程中应用广泛的值得注意的方法。缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强第二节沉淀方法的分类盐析法—蛋白质在水溶液中的溶解度受盐浓度影响盐溶盐析（破坏水化膜、中和电荷）2、加入高浓度中性盐后，盐离子与生物分子表面的带相反电荷的离子基团结合，中和了生物分子表面的电荷，降低了生物分子与水分子之间的相互作用，此时生物分子很容易相互聚集，在溶液中的溶解度降得很低，从而形成沉淀从溶液中析出。2、盐析公式及讨论讨论2、β值的特性及对盐析的影响3、分段盐析3、盐析操作要点通常采用中性盐，最常用（NH4）2SO4，优点：1、溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。硫铵在0℃时的溶解度70.6g/100mL，Na2SO4-4.9,NaH2PO4-1.62、不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的（NH4）2SO4保存可达数年之久。3、次常用Na2SO4。缺点：在30℃以下溶解度较低，主要用于热稳定蛋白。3.3盐析的操作与应用加盐的方法3.3.2盐析的影响因素不同浓度的蛋白质溶液产生沉淀所要求的临界盐浓度不同。高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度沉淀，若蛋白质浓度过高，易产生各种蛋白质的共沉淀作用。低浓度的蛋白质，共沉淀作用小，但回收率降低。较适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％，相当于25mg/mL～30mg/mL。pH值对盐析的影响温度的影响无机盐种类阴离子盐析作用顺序柠檬酸盐>PO43－>SO42－>CH3COO－>Cl－>NO3－>SCN－阳离子盐析作用顺序（一价）NH4+>K+>Na＋3.3.3沉淀的再溶解3.3.4脱盐有机溶剂沉淀法（2）脱水作用2、影响有机溶剂沉析的因素（二）样品浓度（三）pH值（四）离子强度3、有机溶剂沉淀法的应用（二）应用实例等电点沉淀法2、应用其他沉析技术二、选择性变性沉淀法第三节沉淀技术的应用3.3.2核酸