生药贡静的超氧化物歧化酶SOD的生产学习PPT教案.pptx
上传人:王子****青蛙 上传时间:2024-09-12 格式:PPTX 页数:18 大小:118KB 金币:10 举报 版权申诉
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超氧化歧物酶的概念超氧化歧物酶的概念超氧化歧物酶的来源超氧化歧物酶的分类超氧化歧物酶的化学反应超氧化歧物酶对人体的作用SOD应用领域SOD应用领域SOD的生产一、材料,试剂及仪器二、操作步骤去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min,6000r/min离心15min,弃去沉淀,得到的上清液即为粗酶液。SOD酶的沉淀分离粗酶液中加入等体积的冷丙酮,搅拌15min,6000/min离心15min,得到SOD酶沉淀。冷冻干燥后即得成品。对成品进行称量并测定酶活力。三、SOD酶的检验酶活性的测定(1)邻苯三酚自氧化速率的测定在10ml试管中加入pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml,在25±0.5℃的恒温水浴中保温10min,然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液(空白管用10mmol/LHCL代替),迅速摇匀倒入1cm比色皿中,以空白管为参比,在325nm下,每隔30s测1次吸光值,连续记录3min,调节连苯三酚溶液用量,将其自氧化速率控制在0.070(±0.002)D/min。经实验测得连苯三酚溶液的用量为6µ1(2)样品活性测定在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液,在25±0.5℃的恒温水浴中保温10min,然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚6µ1,(空白管用10mmol/LHCL代替),迅速摇匀倒入1cm比色皿中,以空白管为参比,在325nm下,每隔30s测1次吸光值,连续记录3min,调节样液体积,使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035(±0.002)D/min,记录此时样液体积。谢谢观看!超氧化歧物酶的来源超氧化歧物酶的化学反应(2)样品活性测定在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液,在25±0.5℃的恒温水浴中保温10min,然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚6µ1,(空白管用10mmol/LHCL代替),迅速摇匀倒入1cm比色皿中,以空白管为参比,在325nm下,每隔30s测1次吸光值,连续记录3min,调节样液体积,使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035(±0.002)D/min,记录此时样液体积。