北京大学硕士学位论文1摘要从苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt菌）HD-1中提取Bt杀虫蛋白，作为抗原免疫家兔，得到高效价的抗血清。利用抗体-抗原-酶标抗体反应，建立了酶联免疫学测定方法（ELISA法），可定量检测转Bt杀虫蛋白基因植物组织内Bt蛋白的含量。用建立的ELISA方法检测了转Bt杀虫蛋白基因烟草（Bt烟草）的叶片和转Bt杀虫蛋白基因棉花（Bt棉）的叶片、花器、铃和蕾等部位，并同生物测试法相比较，发现两种方法有很好的相关性。同生物测试法相比，ELISA法具有检测周期短，操作简便的优点，并且可以精确定量。Bt杀虫蛋白基因已被转入棉花、烟草、杨树和马铃薯等多种植物，其中一些已进入中试和大规模商业化种植阶段，在育种中，ELISA法可提供简便易行的检测手段。用ELISA法检测Bt棉不同时期不同器官杀虫蛋白含量，差异显著。叶和花瓣杀虫蛋白含量最高，铃和蕾次之。整个生长季中，杀虫蛋白的含量在盛花期较高，以后就开始下降。在生长的后期，各器官杀虫蛋白的含量都降至很低的水平，杀虫的效果也明显减弱。研究的结果对于棉铃虫的综合防治具有重要的指导意义。研究还发现，在种子萌发的初期，杀虫蛋白就开始表达，并随着时间的推移，表达量逐渐提高。而在未萌发的种子中，杀虫蛋白含量很低。对棉叶提取液进行超滤处理，ELISA的检测结果显示，在胞浆中杀虫蛋白含量很低，而在膜系统处理液中含量较高，初步推测杀虫蛋白可能结合于膜系统上。关键词棉铃虫；Bt棉；Bt杀虫蛋白；ELISA；生物测试北京大学硕士学位论文2AbstractExtractingBtinsecticidalproteinfromBacillusthuringiensisHD-1andimmunizingrabbits,wegetantiserumwithhighrate.Usingthereactionbetweenantibody,antigen,andenzyme-markedantibody,ELISAmethodisestablished.ThroughdeterminingleavesofBttransgenictobaccoandleaves,flowers,bollsandbractealleavesofBttransgeniccotton,itisfoundthatELISAmethodisrelevanttobioassay.Comparedwithbioassay,ELISAmethodhasthemeritsofspendingshortertime,quantifyingBtinsecticidalproteinandeasyoperation.Btinsecticidalproteingenehasbeentransferredintomanykindsofplants,suchascotton,tobacco,potato,andaspen.Somehavereachedthestepoftestingandcommercialplanting.Inthebreedingofseeds,ELISAisasimpleandapplicablemethod.WefindthatBtcottonhasdifferentBtinsecticidalproteincontentindifferentorganandgrowingperiodusingELISAmethod.LeavesandflowerpetalscontainmoreBtinsecticidalproteinthanbollandbractealleaves.Inthelategrowingperiod,Btinsecticidalproteincontentofeveryorgandecreasessignificantly.Theresultisverysignificanttothesystemicpreventionofbollworms.WealsofindthatBtinsecticidalproteinbeginstoexpressintheearlystageofsproutofseeds.However,seedsthathavenotsproutedcontainverylittleinsecticidalprotein.Determiningthecottonleaf’ssuper-filteringsamplebyELIS