菌种管理制度1、目得建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程,规范微生物学检定用菌种得管理,最大限度降低变异率,确保菌种得溯源性与稳定性,从而确保微生物学检验结果得准确可靠。2、适用范围本规程适用于检定用菌种得管理,包括菌种得购买、保存、传代、使用及销毁等。3、定义标准菌株就是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供得冷冻干燥菌。传代用菌种就是指用标准菌株制备得采用特定保存方法长期固定保存得菌种,用于传代及制备工作用菌种。工作用菌种就是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后,作为日常工作使用得菌种。菌种得代就是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内,每萌发一次即称为一代,从菌种保藏中心获得得冷冻干燥菌种为第0代。4、职责4、1部门主管负责菌种得申购、接收、保存分发。4、2微生物检验员负责菌种得确认、传代、使用及销毁。5、规程5、1菌种得申购部门主管根据菌种得使用情况,提出年度购买计划(包括临时检验需要),填写申购流程,经审批后,向中检所菌种保藏中心或省(市)药检所购买冻干菌种(标准菌株)或传代用菌种,购买时,需确定菌种得代数,以便控制传代代数。5、2菌种得接收菌种到达实验室后,由部门主管接收菌种,检查其名称与数量,以及每一支得完整性,同时将菌种得所有信息,填写在《标准菌株库存记录》上,内容包括:名称、数量、编号(无编号者按检定菌种得编号原则编号)、代数、来源、接收日期、接收人等,并将其暂贮存于4～8℃冰箱中,在一周内必须完成转种。5、3菌种得保存5、3、1工作用菌种得保存工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜得琼脂斜面培养基上,待菌生长充分以后,转移至4～8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种得短期保存,并应随时检查其污染杂菌与变异等情况,发现异常情况,经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同,细菌:每个月转种一次;酵母菌及芽胞:3~6个月转种一次;丝状真菌每年转种一次。5、3、2传代用菌种得保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。5、3、2、1甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面得菌苔,并通过接种环与试管壁之间得轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中得无菌纯化水中,调整菌液浓度,使其等同于10号比浊管,向已制备好得菌悬液中加入等体积得无菌甘油(浓度20%),即为10%甘油菌悬液,轻轻振摇,使内容物充分混合,分装于无菌小试管,在-30℃冷冻条件下保存。此甘油冷冻管为第2代(G2)。可以每隔2年转种一代。使用时,取出一支放至室温,转种增菌培养或接种至琼脂斜面复苏,挑取纯菌落传代或工作用。此种方法主要适用于需氧细菌与酵母菌得保藏(如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌)。5、3、2、2液体石蜡保存法5、3、2、2、1无菌液体石蜡得制备:选用优质化学纯液体石蜡,将液体石蜡分装加塞,用牛皮纸包好,在121℃灭菌30分钟,置40℃恒温箱中蒸发水分,经无菌检查后备用。5、3、2、2、2液体石蜡管得制备:将菌种穿刺接种于半固体高层培养基中,在适宜条件下培养结束后,在层流台下用无菌吸管吸取上述无菌液体石蜡至培养好得菌种管内,并使石蜡高出菌种表面约1cm使菌体与空气隔绝,并将试管直立,置于-20℃冷冻或2～8℃冰箱中保存。此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽孢杆菌得保存(如枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等)。5、3、3各菌种得保存方法、条件及期限,见下表1表1传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限菌种名称保存方法保存温度保存期限大肠埃希菌〔CMCC(B)44102〕甘油冷冻管-30℃2年金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63501〕乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B)50094〕白色念珠菌〔CMCC(F)98001〕液体石蜡管2-8℃1年黑曲霉菌〔CMCC(F)980035、4菌种得处理与保藏5、4、1标准菌株得复苏、确认、传代5、4、1、1标准菌株得复苏5、4、1、1、1物品及HYPERLINK""\t"_blank"试剂:接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球。5、4、1、1、2培养基改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮;液体硫乙醇酸盐培养基:用于生孢梭菌复苏、复壮;营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮;改良马丁培养基:用于白色念珠菌复苏、复壮5、4、1、1、3标准菌株得复苏操作步骤:以下操作均在生物安全柜内进行。在安瓿得外表面用75%得酒精擦拭并让其自然风干。用一小砂轮在安瓿得上部划一条线,用手轻