唾液淀粉酶最适pH的测定【原理】酶的化学结构上具有许多极性基团，在不同的酸碱环境中，这些基团的解离状态不同，所带的电荷也不同。只有当酶处于一定的解离状态下，酶才能与作用物结合并发挥作用。方法：相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下，唾液淀粉酶的活性不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量的碘液作用所显示的颜色也不同，并通过测定吸光度，得出唾液淀粉酶的最适pH范围。【实验仪器与试剂】试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、721G-722G可见分光光度计、吸量管（1ml5ml10ml）移液枪试剂药品：2.5g/L缓冲淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水【操作步骤】唾液的获取：蒸馏水漱口,然后含一大口水约1min,期间做咀嚼运动，然后收集于烧杯中。不同pH缓冲液的配制（定容到10ml）pH0.2mol/LNa2HPO4（ml）0.2mol/LNaH2PO4(ml)6.20.9254.0756.41.3253.6756.61.8753.1256.82.4502.5507.03.0501.9507.23.601.407.44.050.957.64.350.65淀粉用量测定管号123空白7.0pH缓冲液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.10.20.3-唾液（稀释10倍）0.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液H205.95.85.76.0混匀，观察现象，并选择适中的一支，记录其用量0.3ml2.5g/L淀粉为最适量（颜色最浅）酶液稀释倍数确定稀释倍数51015202530酶液（ml）10.50.40.250.20.2H20(ml)44.55.64.754.85.8管号1234567稀释倍数51015202530空白pH7.0缓冲液0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉0.30.30.30.30.30.30.3唾液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液H20(ml)6666666混匀，观察现象，并选择适中的一支，记录其稀释倍数观察到酶稀释10倍2号管颜色最浅，所以酶稀释10倍最适合最适pH确定pH试剂6.26.46.66.87.07.27.47.6pH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉0.30.30.30.30.30.30.30.3某倍数唾液0.10.10.10.10.10.10.10.1（由第4步测定）混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O(ml)66666666混匀，用蒸馏水调零，测定A660nmA660nm0.1650.1720.2220.1990.1790.1990.1220.197【计算结果】以A660nm为纵坐标，pH为横坐标作图，并找出唾液淀粉酶的最适pH【讨论】本实验中，当唾液淀粉酶的活性最大时，淀粉被分解的最多，剩余的底物的量最少，A值最小，过酸或者过碱均会影响酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。由所作曲线可知唾液淀粉酶的最适pH值在7.4左右。在PH<7.4时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而呈现没有规律，在PH=7.4达到最大值，在PH》7.4时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而降低，因此唾液淀粉酶的最适pH值为7.4，如果过碱会降低酶的催化活性。最适PH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液PH高于或低于最适PH时，酶活性降低，远离最适PH时还会导致酶变性。实验以结果作图发现图没有一定的规律，可能是因为操作不规范，不能准确添加试剂，保存时间不符合或者是操作过程中出现错误。