Thanatin的原核表达、纯化及其抗菌活性的检测的任务书任务书一、任务目标本次任务的目标是进行Thanatin的原核表达、纯化以及其抗菌活性的检测，从而探究其在抗微生物感染领域的应用价值。二、任务内容1.构建Thanatin原核表达载体选取合适的原核表达载体，将Thanatin序列克隆入载体中，构建Thanatin原核表达载体。通过限制性酶切、PCR扩增等技术进行鉴定。2.转化原核表达菌通过电转化、化学转化等方法将Thanatin原核表达载体转化进革兰氏阴性菌表达菌中，如大肠杆菌，并进行酶切鉴定。3.定向表达Thanatin在培养条件下诱导表达Thanatin，并通过SDS-PAGE凝胶电泳、Westernblotting等技术检测表达情况。4.预处理和纯化Thanatin通过细胞破碎、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析等技术将Thanatin进行纯化。5.鉴定纯化的Thanatin通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、循环二级质谱（MALDI-ToFMS）等技术对纯化的Thanatin进行鉴定及定量。6.检测Thanatin抗菌活性选取一些常见的革兰氏阳性和阴性菌（如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等）进行抗菌活性测试，通过测定其最小抑菌浓度（MIC）来检测其抗菌活性。三、任务步骤及时间安排1.样品准备和实验条件搭建阶段（1周）2.构建Thanatin原核表达载体（1周）3.转化原核表达菌（1周）4.定向表达Thanatin（2周）5.预处理和纯化Thanatin（2周）6.鉴定纯化的Thanatin（1周）7.检测Thanatin抗菌活性（2周）四、预期成果1.构建Thanatin原核表达载体的成功率达到90%以上。2.获得Thanatin表达菌，并经过酶切鉴定确认。3.Thanatin纯化得到纯度超过90%的蛋白样品。4.鉴定纯化的Thanatin。5.检测Thanatin抗菌活性，得到相应的抑菌结果。五、参考文献1.YountNY,BayerAS,XiongYQ,etal.YeastengineeredtoproduceahumanizedantimicrobialpeptideexhibitenhancedresistancetoinfectionswithCandidaalbicansandStaphylococcusaureus.Antimicrobialagentsandchemotherapy,2006,50(10):3298-3306.2.BhuniaAK,JohnsonMC,RayB.Purification,encapsulation,andantimicrobialspectrumofbacteriocinproducedbyPediococcusacidilactici.JournalofAppliedBacteriology,1988,65(4):261-268.3.ZhangN,YuanY,ZhangX,etal.TheantimicrobialpeptidethanatindisruptsthebacterialoutermembraneandinactivatestheN‐acetylglucosaminidaseoftheglycan‐recyclingprocess.Microbiologyandimmunology,2013,57(2):89-98.