第一节诱变(yòubiàn)育种一、概述(ɡàishù)（二）诱变育种技术(jìshù)在育种工作的作用（三）高产菌株诱变(yòubiàn)育种的特点二、诱变育种方案(fāngàn)的设计三、诱变育种(yùzhǒng)的一般步骤（一）出发(chūfā)菌株的选择（一）出发(chūfā)菌株的选择（二）前培养(péiyǎng)（二）前培养(péiyǎng)（三）菌悬液的制备(zhìbèi)（四）诱变(yòubiàn)处理2.诱变剂量的选择高产菌株在低剂量时效果较好，而对多核细胞、孢子(bāozǐ)、低产菌株或质量性状处理剂量不宜过低。经多次诱变处理已钝化的菌株可用一次高剂量处理来激活；一次较高剂量的强诱变后，通常接着进行2~3次较低剂量的温和诱变，以利于菌株遗传性状的稳定。在一次诱变中，可以分别采用不同剂量处理出发菌株，从中选出最佳剂量诱变剂量的控制方法化学诱变剂：诱变剂的浓度、处理时间和处理条件；物理诱变剂：照射距离、照射时间和照射条件3.处理方法(fāngfǎ)单一诱变剂处理;复合处理：两种或两种以上诱变剂同时处理、不同的诱变剂交替处理、同一诱变剂连续处理以及紫外线与光复活交替处理等(注意！)3.处理方法直接处理：在缓冲液或无菌生理盐水体系中对出发菌株进行诱变处理，然后涂平板分离(fēnlí)突变株；生长过程处理：在摇瓶培养基或固体平板中加入诱变剂，在菌体生长时进行诱变处理。（适用？）（五）后培养(péiyǎng)（六）变异菌株的分离(fēnlí)及筛选2.筛选：包括初筛，复筛和终筛等。明确筛选目标：产量突变还是其它突变型；产量准备(zhǔnbèi)提高多少等；一次诱变目标不要太高。制定筛选方案：筛选准备(zhǔnbèi)分几步；筛选采用的培养方法和培养条件；每一步准备(zhǔnbèi)筛选多少菌株；每一步准备(zhǔnbèi)采用的分析方法等。制定筛选方案时的一些(yīxiē)基本原则筛选的一般(yībān)步骤四、诱变(yòubiàn)育种工作中应注意的问题要养成良好的工作习惯：如仔细观察细微的形态变化、要详实记录菌株的诱变(yòubiàn)史和诱变(yòubiàn)谱系。诱变(yòubiàn)育种技术要和其他育种手段相结合。诱变(yòubiàn)育种由于其筛选的盲目性，突变的不定向性，工作量十分大，因此要对整个工作进行合理的设计并结合新技术提高其工作效率。第二节营养缺陷(quēxiàn)型突变株的筛选与应用一、营养缺陷(quēxiàn)型及其应用完全培养基CompleteMedium（CM）含有满足某微生物的所有(suǒyǒu)营养缺陷型和野生型菌株生长所需营养物质的天然或半合成培养基。基本培养基MinimalMedium（MM）：不含生长因子仅能满足某微生物的野生型菌株生长需要的最低成分合成培养基。补充培养基SupplementedMedium(SM)：补充了一种或数种生长因子，以满足某微生物的特定的营养缺陷型生长的培养基，其中的生长因子多是通过直接添加AA、碱基或维生素而提供。与营养要求(yāoqiú)有关的三种遗传型（二）营养缺陷(quēxiàn)型突变株的应用营养缺陷型突变株在代谢(dàixiè)调控育种中的应用(1)C.glutamicum应用渗漏突变株进行代谢调控育种渗漏突变株(leakagemutant)：一种遗传障碍不完全的营养缺陷型，其特点是酶的活力下降(xiàjiàng)但不完全丧失，使其能少量合成某一代谢产物，但产物的量又不造成反馈抑制。优点：不需要限量添加生长因子。筛选：营养缺陷型突变株→诱变→挑选在MM上生长缓慢且菌落小的回复突变株不同类型突变(tūbiàn)株积累L-赖氨酸的水平二、营养(yíngyǎng)缺陷型的筛选淘汰(táotài)野生型抗生素淘汰(táotài)野生型饥饿(jīè)法检出缺陷(quēxiàn)型夹层(jiācéng)平板的制备逐个(zhúgè)检出法分离得单菌落：CM点种：逐个(zhúgè)菌落依次点种至MM和CM上培养：在MM上不长、CM上长的菌落为缺陷型影印培养法分离单菌落：CM影印：用“印章”影印至MM和CM上培养：在MM上不长所对应的CM上的菌落即为缺陷型筛选特定的缺陷型时，用SM取代CM则可以得到(dédào)目的菌鉴定缺陷(quēxiàn)型----生长谱法判断：A、D生长(shēngzhǎng)，AA缺陷型B、D生长(shēngzhǎng)，维生素缺陷型C、D生长(shēngzhǎng)，碱基缺陷型A~B、D生长(shēngzhǎng)，AA、维生素双缺A~C、D生长(shēngzhǎng)，AA、碱基双缺B~C、D生长(shēngzhǎng)，维生素、碱基双缺详细鉴定生长因子组合：10