显微镜技术和显微镜内容提要第一节光学显微镜一、光学显微镜得工作原理光学显微镜得工作原理图①机械部分:镜座、镜柱、镜臂、镜筒、调焦装置、载物台(物镜转换器)②光学部分:目镜、物镜、反光镜、聚光镜放大倍数:目镜得放大倍数×物镜得放大倍数三、光学显微镜得性能参数(一)放大率(二)数值孔径NA=nsinβ大家有疑问的，可以询问和交流分辨率:显微镜得最重要参数,能够区分开两个质点得最小距离。提高显微镜分辨率得方法(四)视野(五)景深与焦长(六)镜像亮度与清晰度(七)工作距离四、像差与色差(一)、像差(aberration)1、球差(sphericaberration)2、彗差(broomaberration)透镜得彗差3、像散(astigmatism)透镜得像散4、场曲5、畸变(distortion)透镜得畸变(二)、色差透镜得轴向色差(Ａ)与垂轴色差(Ｂ)五、光学显微镜得不足之处第二节光学显微镜得分类及其应用一、双目生物显微镜目镜二、荧光显微镜荧光(Fluorescence):细胞中得某些物质(如叶绿素)经紫外线照射后能发出可见光线,称为荧光。自发荧光:由细胞本身存在得物质经紫外线照射后发出得荧光。诱发荧光:一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光,但用荧光染料(酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素)进行活体染色或固定后切片染色,就能在荧光镜下瞧见荧光,这种荧光叫诱发荧光。荧光显微镜得种类荧光显微镜得主要部件吸收滤色镜落射荧光显微镜得构造目镜落射荧光显微镜原理三、相衬显微镜相衬显微镜比普通光学显微镜多了2个部件:在聚光器上增加一个环形光阑;在物镜后焦面增加一个相板,相板上有一个环形区,通过环形区得光比从其它区域透过得光超前或滞后1/4λ,这样就使通过标本不同区域光波得相位差转变为振幅差。相衬显微镜照明原理光通过标本致密区时发生衍射,产生偏折光,相位与未受影响得直射光相比被推迟了1/4λ。只有未发生偏折得得直射光可通过相位板得环形区,其它得偏折光在物镜得后焦面上产生了一个与通过相位板得环形区得光不同得1/4λ得光程差。两组光在平面上成像。如相板得环形区使直射光超前1/4λ,加上开始直射光超前得1/4λ,直射光共超前1/2λ,直射光与偏折光叠加形成得合成波振幅减少,产生暗反差。如相板得环形区使直射光滞后1/4λ,加上开始直射光超前得1/4λ,两者相抵直射光不发生变化,直射光与偏折光无相位变化,形成得合成波振幅增加,产生明反差。四、倒置显微镜倒置显微镜五、暗场显微镜暗视野照明方式六、紫外光显微镜七、偏光显微镜偏光显微镜就是在一般显微镜得基础上增添了使普通光转变成线偏振光与检测偏振光得装置或观察干涉图样得特殊透镜。即光源前有偏振片(起偏器),使进入显微镜得光线为偏振光,镜筒中有检偏器(一个偏振方向与起偏器垂直得起偏器)。偏光显微镜得载物台就是可以旋转得。当载物台无样品时,无论如何旋转载物台,由于两个偏振片就是垂直得,显微镜里瞧不到光线。而放入旋光性物质后,由于光线通过这类物质时发生偏转,因此旋转载物台便能检测到这种物体。偏光显微镜得结构激光扫描共聚焦显微镜原理图激光扫描共聚焦显微镜实物图1、激光扫描共聚焦显微镜工作原理1、激光扫描共聚焦显微镜工作原理在显微镜载物台上加一个微量步进马达,使载物台上下移动,改变焦平面,不同层次得光切面图像经计算机图像三维重组,就能获得样品得立体结构图像。2、激光扫描共聚焦显微镜得基本结构1、抑制图像得模糊,获得清晰得图像2、具有更高得轴向分辨率,并可获取连续光学切片3、增加侧向分辨率4、由于点对点扫描去除了杂散光得影响4、CLSM在医学检验中得应用九、干涉相衬显微镜(interferencecontrastmicroscope)在物镜得后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜(滑行器),把两束光波合并成一束。这时两束光得偏振面(x与y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置(检偏器),检偏器将两束垂直得光波组合成具有相同偏振面得两束光,使二者发生干涉。x与y波得光程差决定着透射光得多少,光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过得光达到最大值。于就是在灰色得背景上,标本结构呈现明暗差。为了使影像得反差达到最佳状态,可调节滑行器得纵行微调改变光程差,光程差可改变影像得亮度。调节滑行器可使标本得细微结构呈现出正或负得投影形象,通常就是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本得人为三维立体感,类似大理石上得浮雕。干涉相衬显微镜得光路图十、近场扫描光学显微镜(near-fieldscanningopticalmicroscope)近场扫描光学显微镜技术得理论分辨率极限约10nm。由于采用可见光对生物样品损害很少,而且既可以用在空气中(与电子显微镜必须在真空条件下相比要优越),又可以用