显微镜技术.ppt
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目录显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器,是人类进入原子时代的标志。主要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。显微镜的历史:最早的显微镜是荷兰的眼镜商詹森(Z.Jansen1588-1628)于1604年制造。半个多世纪后,英国物理学家胡克(R.Hooke1663-1703)制造了第一台具有科学价值的显微镜,他首次观察到木栓的显微图象,发现了细胞。真正观察到活细胞的是荷兰科学家列文虎克(AntonieVanLeeuwenhoek1632-1723),他用自制的显微镜观察到池塘中的原生动物、细菌等。1931年,恩斯特·鲁斯卡通过研制电子显微镜,使生物学发生了一场革命。这使得科学家能观察到像百万分之一毫米那样小的物体。1986年他被授予诺贝尔奖。一、显微镜的分类体视显微镜倒置显微镜二、明视野显微镜显微镜的光学系统目镜的放大倍数(2)物镜:物镜的放大倍数:5x至20x为低倍镜,40x至80x为高倍镜,90x至100x为油镜。物镜的放大倍数(W):W=160mm(光学筒长)/fmm(物镜焦距),光学筒长是指物镜上、下焦点平面之间的距离,一般的为100mm,也有的长170mm。物镜的数值孔径,又称镜口率,常用NxA或A表示。数值孔径越大吸光量越多,分辨力越高。NxA=nxsina/2(n是指物镜与标本之间介质的折射率;a指镜口角。马铃薯淀粉颗粒4倍镜下观察图片马铃薯淀粉颗粒10倍镜下观察图片马铃薯淀粉颗粒40倍镜下观察图片(3)聚光器及集光器聚光器是由聚光镜、孔径光阑、滤光镜等组成。用途:将光线集合成束,增加照明度,提高物镜分辨力。集光器是由集光镜和视场光阑组成。(4)光源显微镜的照明光源有天然光源和人工光源两种。天然光源,即利用太阳光,最好是白云反射出来的光,一般不用直射光,必要的时候要加滤光片或毛玻璃,以免影响观察效果和损坏眼睛。人工光源,如显微镜灯,日光灯,台灯等。要求是光源强且稳定,最好强度能调节;发光的颜色要适宜,最好能近似天然白光;光源发热不能过多,尤其是活体观察要防止高温造成标本死亡,所以一般要放滤光片。(5)滤光器显微镜的机械装置显微镜的机械装置(4)镜筒:金属制的圆筒,附着于镜臂上部,其上端放置目镜,下端连接物镜转换器。在设计上目镜、镜筒和物镜的中心必须必须在同一条直线上。安装目镜的镜筒有单筒和双筒两种,双筒的两者之间距离可以调节,以适应人的眼距。双筒之中有一个目镜镜筒装有屈光度调节器,便于两眼视力不同的观察者。(5)物镜转换器:固着于镜筒的下端,可自由旋转,更换物镜。当他们转到工作位置时即与光轴合轴。安装物镜时要把镜筒提高,以防止镜头碰到载物台。转换物镜要用手指捏紧转换蝶,而不要推物镜,防止破坏合轴。(6)调焦装置:为了得到清晰的物像,必须调节物镜与标本之间的距离,使它与物镜的工作距离相等,这种操作叫做调焦。粗调螺旋粗调螺旋用于粗放调节物镜和标本的距离,老式显微镜粗调螺旋向前扭,镜头下降接近标本。新近出产的显微镜(如Nikon显微镜)镜检时,右手向前扭动使载物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本远离物镜。微调螺旋用粗调螺旋只能粗放地调节焦距,难于观察到清晰的物像,因而需要用微调螺旋做进一步调节。微调螺旋每转一圈镜筒仅移动0.1mm(100μm)。新近出产的研究显微镜的粗调螺旋和微调螺旋是共轴的。显微镜的分辨率显微技术目的要求及原理试剂和器材显微镜使用方法和注意事项(4)光轴中心调节。显微镜在观察时,其光学系统中的光源、聚光器、物镜和目镜的光轴及光阑的中心必须跟显微镜的光轴同在一直线上。使用带视场光阑的显微镜时,先将光阑缩小,用10×物镜观察,在视场内可见到视场光阑球形多边形的物像。如此像不在视场中央,可利用聚光器外侧的两个调整旋钮将其调到中央,然后缓慢地将视场光阑打开,能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的多边形物像完全与视场边缘内接,说明光线已经合轴。镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大,易于发现目标和确定检查的位置。将标本片放置在载物台上,用标本夹夹住,移动推动器,使被观察的标本在物镜正下方,转动粗调节旋钮,使物镜调至接近标本处,用目镜观察并同时粗调节旋钮慢慢升起载物台(或下降镜筒),直至物像出现,再用细调节旋钮物像清晰为止。用推动器移动标本片,找到合适的标本物像并将它移到视野中进行观察。3.高倍镜观察在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜,低倍、高倍物镜同焦的,在正常情况下,高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。若使用不同型号的物镜,在转换物镜时要从侧面观察,避免镜头与玻片相撞。然后目镜观察,调节光照,使亮度适中,缓慢调节粗调节旋钮,使载物台