微生物显微镜和显微技术9/13/2024借助于显微镜观察微生物的方法即显微技术，显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。显微镜的种类和原理一、显微镜的种类和原理普通光学显微镜的几个基本概念1、普通光学显微镜油镜使用2、暗视野显微镜特点:只能看到物体的存在与运动,不能辨清其微细结构。基本原理:把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。微分干涉差显微镜DIC显微镜下的硅藻形态4、荧光显微镜绿色：铜绿假单胞菌黄色：蜡样芽孢杆菌1931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。用高速电子束代替光束。放大倍数可达80万倍，分辨的最小极限达0.2纳米。1、透射电子显微镜高尔基体的TEM照片(伪彩色)2、扫描电子显微镜扫描电子显微镜原理3、扫描隧道显微镜（STM）4原子力显微镜特点（一）光学显微镜制样（1）压滴法：菌悬液滴于载玻片上，加盖玻片，观察。（2）悬滴法：盖玻片中央加一小滴菌悬液，翻转置于特制的凹载玻片上，观察。（3）菌丝埋片法：无菌小块玻璃纸铺于平板表面，涂布放线菌或霉菌孢子悬液，培养，取下玻璃纸置于载玻片上，观察菌丝形态。用途：微生物的细致形态和结构染色前需要对样品固定.常用固定方法：酒精火焰加热、化学固定1)、简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检2）、革兰氏染色法：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察（二）、电子显微镜的制样样品在进行电镜观察前必须进行固定和干燥，制样时一般采用重金属盐染色或喷镀，提高在电镜下的反差。※1、透射电镜的样品制备负染法负染色法观察的鞭毛在真空条件下，用电子散射能力强的重金属原子来喷镀样品表面，这样在样品和没有喷镀的区域形成了较强的反差，而没有喷镀的部分成了样品的投影，根据投影了解样品的立体形状、高度。投影法观察的噬菌体这是最常用的方法，可以观察细胞或其它样品内部的细微结构。样品固定→脱水→包埋→切片。只有在20—100纳米厚度的切片用透射电子显微镜才能观察，所以一般细菌样品，一个细胞要分割成10片到50片。样品-196℃迅速冷冻→加温到-100℃→切割样品→升华(真空)掉断口处的冰→重金属喷镀断口表面→电子显微镜观察冰冻蚀刻法制备的酵母菌内部结构图扫描电子显微镜拍的葡萄球菌的表面作业