会计学/第一节原料(yuánliào)选择及预处理细胞(xìbāo)破碎第二节酶的粗提沉淀过程中随时监测蛋白浓度和酶活力讨论：（a）盐的加入(jiārù)速度合适（b）蛋白质开始沉淀处的硫铵浓度与蛋白浓度有关（c）硫铵浓度表示法；饱和度25℃4.1M（d）硫铵饱和溶液pH<7，若目的酶易酸变性必须用缓冲液（e）硫铵溶液密度较高（1.24），故需较大离心力此步可除去75%以上的杂蛋白，且可使蛋白浓缩透析与浓缩(nónɡsuō)透析技术(jìshù)原理图超滤技术(jìshù)原理图第三节酶的精制(jīngzhì)纸层薄层(báocénɡ)3）离子交换层析（ionexchangechromatography）：交换剂上带电荷，可根据样品(yàngpǐn)的电荷予以分离a）阳离子交换层析b）阴离子交换层析c）离子交换剂的类型：离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶d）实验室常用的离子交换剂：阴离子交换剂DEAE-Cellulose、DEAE-Sephadex；阳离子交换剂CM-Cellulose、CM-Sephadexe）离子交换剂的预处理：去杂质；溶胀；除小颗粒；改型阳离子交换剂：碱→水→酸→水→平衡阴离子交换剂：酸→水→碱→水→平衡f）柱层析：床体积等于2-5倍束缚样品需要量；径∶高=1∶15；上样量不超过柱体积的10%（*注意上样方法）；洗脱方法有两种——不连续梯度洗脱和连续梯度洗脱；分布收集(shōují)器收集(shōují)每管2-3mlg）交换剂后处理：饱和NaCl→水→酸或碱→水→平衡连续梯度洗脱(xǐtuō)离子交换(lízǐjiāohuàn)层析Anionexchangechromatography4）凝胶层析(cénɡxī)（分子筛层析(cénɡxī)）（gelfiltrationchromatography）：根据分子量大小予以分离凝胶过滤(guòlǜ)层析原理图Gelfiltrationchromatography5）亲和层析（affinitychromatography）特异性结合(jiéhé)亲和层析原理(yuánlǐ)Affinitychromatography二、超离心技术(jìshù)利用物质的沉降系数、质量、浮力因子等方面的差别用强离心力进行分离二、电泳(diànyǒnɡ)（electrophoresis）技术PAGE和SDS-PAGE盘状电泳(diànyǒnɡ)（A）和平板电泳(diànyǒnɡ)（B）第四节提纯(tíchún)过程中的定量纯化(chúnhuà)倍数=回收率%=×100酶的提纯(tíchún)过程记录格式第五节酶蛋白(dànbái)分子量的测定渗透压法超速离心法SDS-聚丙烯酰胺电泳(diànyǒnɡ)法SDS-PAGE的分子量标准(biāozhǔn)曲线凝胶层析(cénɡxī)法凝胶过滤(guòlǜ)分子量标准曲线思考题/作业