实验一凝集反应实验目的：1.掌握凝集反应的原理2.直接凝集反应3．间接凝集反应实验内容：1.直接凝集反应2．间接凝集反应实验原理：当颗粒性抗原与其相应的抗体特异结合时，在电解质存在下，两者比例合适时，可出现凝集颗粒，此现象称凝集反应。一、直接凝集反应一血型鉴定人类血型是以红细胞表面所带抗原的不同而命名。红细胞表面主要带A、B两种抗原，人类血清中主要含有两种抗体（抗A或抗B抗体），用抗A或抗B标准血清可以鉴定四种不同的血型，既A、B、AB、O表型。现介绍玻片直接凝集法。（一）材料：人抗A和抗B标准血清、生理盐水、被检者红细胞、采血针、试管、载玻片、滴管、皮肤消毒剂。（二）方法1、用酒精棉球消毒指端皮肤，针刺受检者指端取血一滴，加入盛有2ml生理盐水的试管中，制成红细胞悬液（约2%）。2、取清洁载玻片，用记号笔划分两半，左角上注A字，右角上注B字。3、于玻片A侧中央加抗A型标准血清一滴，于玻片B侧中央加抗B血清一滴。4、用滴管取受检者红细胞悬液加入抗A血清及抗B血清中各一滴，摇动玻片使红细胞与血清充分混匀，15～20min后肉眼或低倍镜观察结果，以凝集现象的有无，按下表报告结果。血型凝集现象抗B标准血清抗A标准血清O－－A－＋B＋－AB＋＋二、间接凝集反应将可溶性抗原吸附在惰性颗粒载体上，与其相应抗体可发生凝集，称为间接凝集反应。以乳胶吸附猪细小病毒作为抗原，猪细小病毒免疫血清作为抗体，两者相遇，即出现凝集。（一）材料：作为抗体的猪细小病毒免疫血清、吸附猪细小病毒的乳胶、生理盐水、载玻片等。（二）方法1、取洁净载玻片，用记号笔分为两格。2、用滴管取生理盐水一滴加于玻片右端，再取猪细小病毒的乳胶一滴加于玻片左端。3、各加一滴作为抗体的猪细小病毒免疫血清，分别混匀。4、缓慢摇动2～5min，并观察结果。思考讨论1、直接凝集反应与间接凝集反应的区别。实验二免疫沉淀反应实验目的：1.掌握免疫沉淀反应的原理2.琼脂糖双向免疫扩散实验内容：1.琼脂糖双向免疫扩散实验原理：当可溶性抗原与其相应抗体相遇，在有电解质存在的条件下，二者比例合适可出现肉眼可见的白色沉淀，故名沉淀反应。。一、琼脂糖双向免疫扩散在含有电解质的琼脂中，抗原抗体分子互相弥漫扩散，当比例合适时可出现沉淀带。此法可用于分析抗原成分，以及鉴定抗体的纯度等。（一）材料：1％生理盐水琼脂糖、人IgG、抗人IgG血清、载玻片、打孔器等。（二）方法1、将1％盐水琼脂糖加热溶化。2、取一洁净载玻片，放水平台上，将已熔化的琼脂3～4ml趁热倾注在玻片上制成厚薄均匀的琼脂糖凝胶板。3、待琼脂凝固后，按图2．1打孔。4、在中心孔内加入抗人IgG血清。5、1孔加入空白对照。6、于2，3，4各孔中分别加入不同浓度的人IgG。7、将琼脂糖凝胶板放湿盒中，置37℃温箱中24h后，取出观察结果。1423图2．1实验三免疫酶技术ELISA实验目的：1.掌握免疫酶技术ELISA的原理2.掌握免疫酶技术ELISA的技术实验内容：免疫酶技术ELISA免疫标记技术（immunolabellingtechniques）是指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学（或生物）发光剂等作为示踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。因此，免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。根据试验中所用标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术分为免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。在此基础上发展了生物素-抗生素标记技术。一、免疫酶技术ELISA免疫酶技术是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。其原理是酶与抗体或抗原结合后既不改变抗体或抗原的特异性及免疫反应性，也不影响酶的催化效能。当存在相应酶底物时，酶能催化产生有颜色的产物，颜色的有无及深浅能反映相应的抗原或抗体是否存在及其量的多少。酶联免疫吸附试验（ELISA）是一类常用的免疫酶技术，可用于测定抗体，也可用于检测抗原。该实验常用的酶为辣根过氧化物酶，底物为邻苯二胺（OPD）。实验方法有间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法。一)