第四章培养基的制作教学目的：熟练掌握各级培养基的制作方法。第一节母种培养基的制作一、菌种培养基(一)按营养物质种类分类l.天然培养基常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于各类微生物的生长2.合成培养基是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。适用研究3.半合成培养基利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成(二)按培养基的物理状态分类1.液体培养基不加琼脂，多用于生理生化方面研究,培养液体菌种等。2.固体培养基凝固剂的量,琼脂冬季为1.5%--2.0%,夏季2.2%--2.3%。3.半固体培养基含有较少量琼脂(0.2%--0.5%)的培养基,使培养基未达到固态而呈粘稠状态。二、母种培养基配方：（一）营养液制作1.准备工作3.熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。4.过滤、加可溶药物用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加入糖5.熬琼脂、定容在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。（二）营养液分装1.用注射器分装2.分装标准:分装量为试管长度的1/4—1/5。注意培养基不能沾污试管口。3.塞棉塞棉塞松紧适度，1/3在管外，2/3在管内。4.扎捆7-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高压灭菌锅中。(四)摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2（三）灭菌处理在1.0—1.5kg/cm2压力下维持20--30min。(四)摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2第二节原种、栽培种培养基制作③玉米芯、木屑混合培养基配方玉米芯42%，木屑20%，豆秸20%，麸皮10%，过磷酸钙1.5%，石灰2%，石膏1%，糖0.5%，玉米面3%，料：水1=1：1.4-1.5。此配方适合于培养平菇原种。生长健壮，也可培养金针菇，滑子蘑原种。④软质木屑配方椴木屑75%（木线厂下脚料，颗粒较大），麸皮15%，玉米面5%，石膏1.5%，石灰1%，糖0.5%，过磷酸钙1.5%，尿素0.5%，料，水=1：1.2左右。适用于金针菇，滑子蘑等分解基质能力较弱的品种使用。⑤麦粒、木屑培养基配方新鲜、优质小麦80%，阔叶树木屑20%，木屑：水=1：1左右，拌木屑用煮小麦水，或在此基础上，加入总量0.5%的过磷酸钙，0.5%的蔗糖,1%的石灰，在麦粒煮好后连同木屑拌入。⑥玉米粒培养基配方优质新鲜玉米100%，或后期加入0.5%过磷酸钙，0.5%的糖,1%的石灰。玉米粒培养基制作的原种，具备麦粒原种的优点，后劲更足，接种扩繁量更大。二、原种培养基的制作方法一、谷粒培养基制作1.按配方称量各营养物质配方一：优质新鲜小麦65%，木屑15%，棉籽壳15%，麸皮5%，石膏1%，过磷酸钙0.5%，糖0.5%，尿素0.5%2.谷粒浸泡吸水冬季浸泡24-48小时，夏季加1%石灰（以防变酸）浸泡24小时，隔夜换水。3.煮沸、沥干捞出泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。4.拌料用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最后再一起与麦粒拌匀。5.装瓶(1)装料量应为1/3或1/2罐头瓶，便于培养时摇动基料促进丝均匀生长。(2)擦净并封瓶口封口塑料袋采用规格为13cm×13cm×0.004cm高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一3cm宽菱形口。至少二个皮套。6.装锅灭菌高压灭菌于126℃左右维持2小时；常压灭菌于100℃维持10-12小时，夏季时间可酌情延长。7.出锅、冷却冷却至30℃以下待接种。二、.木屑、玉米芯料培养基制作方法1.按配方称料。2.拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。②装瓶：闷1-2个小时（夏季时间不宜过长）待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下松压平料面，擦净瓶口，打1.5cm粗接种孔至瓶底封口。③灭菌：同谷料培养基制作④出锅、冷却：同谷粒培养基制作三、栽培种制作制作方法基本同于原种制作。需要注意的是栽培种培养基制作一般选用加富的培养料，而且含水量要较原种加大，更利于菌种快速吃料。容器可以用500ml罐头瓶，也可以用（17-18）X（30-35）X（0.04-0.05）cm低压聚乙烯袋。第三节液体菌种制作技术一、液体菌种制作的原理食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝