PEDV感染Vero细胞的蛋白质组学分析及诱导细胞自噬的机制研究的任务书任务书：PEDV感染Vero细胞的蛋白质组学分析及诱导细胞自噬的机制研究一、研究目的猪流行性腹泻病毒（PEDV）是一种严重危害猪类养殖业的病毒，在全球范围内引起了极大的关注和研究。目前，虽然已经得到了一定的治疗和疫苗防治，但其病情仍然难以控制，需要进一步的研究和探索。本次研究旨在通过蛋白质组学分析，探讨PEDV感染Vero细胞时产生的蛋白质变化情况，并进一步研究PEDV是否能够诱导Vero细胞自噬，以及自噬过程中所涉及的机制。二、研究内容1.PEDV感染Vero细胞时的蛋白质组学分析：通过蛋白质组学技术，分析PEDV感染Vero细胞时细胞内蛋白质的变化情况，包括表达水平的上升或下降、新的蛋白质的表达等方面。研究需使用高通量质谱技术，采用TMT标记对蛋白质进行鉴定。2.PEDV诱导Vero细胞自噬的实验：根据先前的研究，PEDV可能会诱导细胞自噬，在本次研究中我们将通过TEM等技术观察PEDV感染Vero细胞后是否存在自噬体的形成，并通过使用自噬抑制剂或基因敲除等技术，验证PEDV是否能够诱导Vero细胞自噬。3.自噬过程中的机制研究：通过比较对照组和PEDV感染组中的自噬相关基因、蛋白质的差异表达情况，探讨PEDV感染Vero细胞时可能涉及的自噬相关通路，包括mTOR信号通路、AMPK信号通路、Beclin1通路等方面。三、研究方法和步骤1.细胞培养和处理：培养Vero细胞并进行PEDV感染；使用TEM等技术检测自噬体形成等。2.蛋白质样品的制备和鉴定：用M-PER重提液淋洗PEDV感染和对照Vero细胞，并用SDS-PAGE将蛋白质分离出来，采用TMT标记技术鉴定这些蛋白质。3.自噬相关基因和蛋白质的检测：使用Westernblot等技术对自噬相关蛋白质、miRNA等进行检测，分析PEDV感染Vero细胞时自噬相关通路的活性变化。四、预期成果1.PEDV感染Vero细胞时蛋白质组学变化情况的解析；2.验证PEDV是否能够诱导Vero细胞自噬以及自噬过程中所涉及的机制；3.对PEDV与自噬相关通路的相互关系有初步的探索。五、参考文献1.ChenNH,etal.PorcineepidemicdiarrheavirusORF3proteincausesendoplasmicreticulumstresstofacilitateautophagy.VetMicrobiol.2018,215:70-76.2.LiH,etal.ExogenousH2ScontributestorecoveryofPEDV-inducedinhibitionofgrowthviainhibitingPEDVreplicationandregulatingapoptosisandautophagyinIPEC-J2cells.IntJBiolMacromol.2020,156:366-380.3.LiW,etal.Porcineepidemicdiarrheavirustriggersautophagyinvitroandinvivo.Viruses.2021,13(5):861.