遗传病的中医治疗[教学要求]第1节手术治疗Wilson病致病机制p104第2节药物治疗第3节饮食治疗一、饮食控制的一般原则二、把握时机第4节基因治疗一、基因治疗的策略和途径一、基因治疗的策略和途径二、基因治疗的方法间接体内疗法的基本过程方法：人工合成、从基因组或通过RNA反转录等方法获得。靶细胞（targetcell）是指接受转移基因的体细胞。靶细胞应满足下列条件：①易于取材；②具有增殖优势，生命周期长，便于体外培养；③便于进行遗传技术操作，易受外源DNA转化；④安全回输；⑤靶向性。目前使用得较多的是造血干细胞、皮肤成纤维细胞、肝细胞、血管内皮细胞和肌细胞等。基因转移是指将外源基因导入靶细胞内。1、化学法应用磷酸钙沉淀法改变细胞膜通透性，以加强细胞从培养液中摄取DNA的能力。转移效率低，成功率约为1/102～103。2、物理法（1）电穿孔法借助电流穿击靶细胞膜使其对DNA通透性增加。有可能使细胞受到损伤。（2）显微注射法用显微技术向细胞核内直接注射外源基因。主要应用于转基因动物。2、物理法（3）微粒子轰击法利用亚微粒钨或金吸附DNA，包裹形成微粒，利用基因枪技术使微粒高速进入靶细胞。2、物理法（1）化学法（2）显微注射法（3）微粒子轰击法3、载体介导基因转移载体能将外源基因特异的转移至靶细胞。分为：病毒载体：将RNA和DNA病毒去除致病性基因，同时具有携带目的基因特性的人工改造病毒。病毒介导基因转移(virusmediatedgenetransfer)是指以病毒为载体，将外源性目的基因通过基因重组技术，组装到病毒载体上，并使重组病毒感染受体宿主细胞，完成基因转移。病毒载体：将RNA和DNA病毒去除致病性基因，同时具有携带目的基因特性的人工改造病毒。病毒载体：将RNA和DNA病毒去除致病性基因，同时具有携带目的基因特性的人工改造病毒。非病毒载体间接体内疗法四、基因治疗的临床运用重症联合免疫缺陷（Severecombinedimmunodeficiencydisease，简称SCID），患者缺乏正常人体免疫功能，其染色体上编码腺苷脱氨酶（简称ADA）的基因发生突变所致。由于ADA是嘌呤代谢中的一种酶，该基因缺陷将导致患者身体细胞中脱氧腺苷的累积，达到高浓度时脱氧腺苷将对免疫系统细胞（如T-细胞和B-细胞）产生毒性。将正常ADA基因与反转录病毒载体相连，构建重组病毒表达载体。从患体体内分离有免疫缺陷的T淋巴细胞。用重组病毒感染体外培养的T淋巴细胞，使正常ADA基因插入到T淋巴细胞基因组中。培养细胞并确认该基因正常表达。将含有正常基因的T淋巴细胞回输到患者的骨髓组织中。经5-6个月治疗，患者体内T淋巴细胞的数量恢复到正常水平，体内ADA酶几乎达到正常水平，免疫功能得到恢复。四、基因治疗的临床运用细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子1小结复习思考题唇裂多指脂质体法用人工脂质体包装外源基因，通过脂质体与靶细胞融合或直接注射到病灶区，将外源基因导入。优点：①无毒性和免疫原性，②不在体内堆积，③大小适合，④可适应不同的细胞膜和生理要求。缺点：转染效率低，瞬时表达。外源基因高效正确的表达。疾病的发病机制及相应基因的结构功能清楚。