浙江省大学生科技创新活动项目结题报告书项目名称：特定基因位点的RNA编辑在肿瘤诊断中的应用研究项目负责人：毛金平学校名称：浙江大学主要依托学科：生物学结题日期：2011.5.13项目类别：大学生科技创新项目□大学生创新创业孵化项目□大学生科技创新推广项目□浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划）实施办公室制一、项目情况项目概况项目名称特定基因位点的RNA编辑在肿瘤诊断中的应用研究项目性质（）基础研究（√）应用研究项目来源（√）自主立题（）教师指导选题起止时间自2010年6月至2011年5月项目状况1、研发阶段2、中试阶段3、批量（规模）生产（选项打√）项目负责人姓名毛金平性别男出生年月1989.8.4入学年月2008.8所在学院生命科学学院生物技术系联系电话15088681602电子信箱954653468@zju.edu.cn项目组主要成员姓名年龄性别专业具体分工毛金平21男生物技术实验操作及数据整理蒋亚建19男临床医学实验操作史晓雯21女生物科学实验操作指导教师姓名金勇丰性别男出生年月1969．11职称教授联系电话13003680728主要研究方向生物制药，基因调控，RNA剪切编辑项目主要内容参阅文献，许多肿瘤中都已经报道有特定基因的RNA编辑位点发生特异性变化，从而为肿瘤的诊断提供一个可能的窗口。本研究项目主要是想通过在RNA编辑水平的研究，观察肿瘤与正常细胞的RNA编辑水平的异常。本项目采用大鼠星形胶质瘤细胞模型，用C6（大鼠星形胶质瘤细胞系）和原代的大鼠星形胶质细胞做对比，比较两者特定基因的RNA编辑水平的异常。从而来发现新的肿瘤分子marker，提供临床的早期诊断，且进一步的探明肿瘤发生的生物学基础等。二、项目实施情况总结内容提示：1.项目实施情况；2.项目研究内容及方法的创新；3.项目成果的学术价值；4.项目成果的社会效益和经济效益；4.研究存在的不足或欠缺，尚需深入研究的问题等。1500字左右。1.项目实施情况第一，生物信息学途径广泛查找基因中可能的RNA编辑位点。删选典型的目的基因位点，初步选取Rsu1，Kcna1，NUMA1为可能目的基因。第二，采用大鼠星形胶质瘤细胞模型，进行大鼠（出生24h内）的星形胶质细胞原代培养，用GAPDH抗体染色鉴定原代星形胶质细胞的纯度，达到可用的纯度之后，提取细胞内总RNA，逆转录，PCR，测序，同时培养C6细胞系，提取细胞内总RNA，逆转录，PCR，测序，比对特点位点两种细胞的RNA编辑水平。第三，通过以上实验安排，研究得出NUMA1基因存在RNA编辑水平的差异。研究分析该特定基因特定位点的编辑是否是肿瘤发生的特异性条件。2.项目研究内容及方法的创新研究内容：①.生物信息学分析确定基因中可能的RNA编辑位点。②.研究确定肿瘤细胞中特定基因RNA编辑位点与生物信息学分析相对。③.研究特定基因特定位点的编辑是否是肿瘤发生的特异性条件。④.分析数据，建立优化利用RNA编辑位点来诊断肿瘤的体系。方法的创新：①.采用生物信息学方法分析可能的RNA编辑位点②.采用大鼠星形胶质瘤细胞模型，进行大鼠（出生24h内）的星形胶质细胞原代培养，用GAPDH抗体染色鉴定原代星形胶质细胞的纯度。③培养C6细胞系④提取细胞内总RNA，逆转录，PCR，测序，比对特点位点两种细胞的RNA编辑水平。3.项目成果的学术价值肿瘤是世界性的难题，其临床治疗是一个问题，同时，如何快速，早期，无损伤的诊断也是一个棘手的问题。本研究通过以上实验安排，研究得出NUMA1基因的存在RNA编辑水平的差异。这种差异有可能是星形胶质瘤的另一个肿瘤学诊断的分子marker。同时也为肿瘤发生提出可能的机理。4.项目成果的社会效益肿瘤是世界性的难题之一，其发病原理机制都还没有得到很清楚地回答，目前所采用的临床诊治手段主要还是依靠手术治疗，外加化学辅助，从机制层面上的治疗非常的少。而对于肿瘤的诊断，还是基本停留在形态学上的一些特征诊断界定，这种诊断的方法通常比较慢，而且准确度不高。一个早期的准确的肿瘤诊断对于肿瘤的后期治疗师非常有利的。肿瘤的诊断在临床上具有十分重要的意义，一个确凿的早期诊断通常可以挽救一个病人的生命，而肿瘤在当前越来越受到人们的重视和关注，具有深远的社会效益。5.研究存在的不足或欠缺①在这个项目中，我懂得了理论和实际的巨大差异。最初将实验考虑的过于理想化导致一些数据无法得到，最后在导师和学长的帮助下，调整思路总结经验最后做出了不错的结果。②肿瘤种类繁多，由于各种实验条件的限制，只以大鼠星形胶质瘤细胞为模型，没有选取多个组织部位。根据文献，我们所选取的位点在至少2个组织中发生RNA编辑的