中药指纹图谱研究技术内容一、中药指纹图谱技术概述（一）中药指纹图谱与中药质量（二）中药指纹图谱研究方法学（三）中药指纹图谱技术的发展指纹图谱2.国内中药质量评价现状3.国外植物药质量评价概况4.中药指纹图谱的意义5.中药指纹图谱建立的原则品种多、产地多;采收、加工不一致－化学组分与含量不同（产品品质优劣不同）有效组分种类繁多、含量相对少；非有效组分成分复杂、含量高－分析检测困难（质量控制指标不统一）基础研究薄弱药材GAP建设滞后8.对策仪器设备技术人员研究经验系统性问题稳定性问题特征性问题（三）中药指纹图谱技术的发展二、中药指纹图谱研究指导原则（一）目的和要求（二）中药指纹图谱标准起草说明（三）中药指纹图谱标准的建立3.供试品溶液的制备有效成分(专属性成分、指标性成分)的理化性投质并结合检测方法的要求提取工艺参照物溶液的制备对照品内标物标准提取物中药指纹图谱检测方法的验证（1）检测方法测定方法、仪器、试剂、测定条件（2）验证专属性（空白试验）精密度试验（RSD<3%）重复性与重现性试验（S<0.95）稳定性试验（S<0.95）系统适应性试验6.指纹图谱的相关性（三）中药指纹图谱标准的建立注意事项（1）所有成分应在2小时左右洗脱，并提供2小时的指纹图谱（2）可建立各个组分的指纹图谱（3）可建立多种方法的指纹图谱（4）可选择典型样品的指纹图谱，或标准提取物的指纹图谱，或具有代表性的勾兑样品的指纹图谱作为标准指纹图谱2.指纹图谱标准的建立（1）药材、中间体指纹图谱标准为企业内控标准，列入起草说明（2）10批供试品（3）标准的规定：供试品的指纹图谱与对照提取物（标准提取物的指纹图谱一致；或供试品的指纹图谱与对照指纹图谱（标准图谱）一致；或通过对各特征峰的位置（相对保留时间、比移值等）、丰度（积分面积或峰高）及相对丰度、光谱特性（颜色）等综合参数的描述予以确定。指纹图谱标准书写格式三、指纹图谱研究的相似度计算（一）、指纹图谱相似度评价原则与方法1.引用参数2.数据获取途径3.相似度算法1.引用参数2.数据获取途径3.相似度算法1.软件开发原则2.市售/常用软件简介3.相似度软件使用过程中应注意的问题1.软件开发原则2.市售/常用软件简介3.相似度软件使用过程中应注意的问题四、中药指纹图谱的研究方法与思路（一）、研究方案设计（二）、样品的选择与收集（三）、供试品的制备（四）、指纹图谱色谱条件研究的思路（五）、相似度值的研究与指纹特征（一）、研究方案设计（二）、样品的选择与收集（三）、供试品的制备（四）、指纹图谱色谱条件研究的思路（1）检测波长的选择（简）（2）柱温的选择（略）（3）进样量（简）（4）色谱柱的选择（重点）（5）检测成分的选择（重点）（6）流动相（梯度表）的选择（重点）示例：蜂胶(BeePropolis)=280nm波长选择：=280nmLichosorbPolarisKromasilDiamonsilCarbosorb（5）检测成分的选择（重点）何首乌生品的液相色谱图（全局图）何首乌生品的液相色谱图（局部放大图）图9上海制首乌指纹图谱北京金象药店制首乌（6）流动相（梯度表）的选择时间∕min初始色谱条件初始色谱条件的设定依据及目的优化条件的选择淫羊藿提取物在初始条件下的色谱图淫羊藿提取物第一次优化后的色谱图梯度速率：初始：100/60min=1.7/min优化：0~1.7CH3CN%CH3CN%起始浓度：根据初始色谱图中主要色谱峰被洗脱时的流动相组成，相应减少~20%。流速：0.5~2.0ml/min2.气相色谱法（2）研究示例样品：广藿香油指纹图谱研究过程检测方法（1）色谱方法广藿香油为广藿香药材经水蒸汽蒸馏而得到的挥发油，均为易挥发组分，拟采用气相色谱法（GC）。（2）仪器：Agilent6890GC（3）色谱柱的选择可供选择的色谱柱：极性非极性中等极性（4）进样方式的确定手动自动顶空2.供试品溶液的制备取广藿香油适量，加醋酸乙酯溶解，即得。2.色谱条件的摸索（1）对梯度速率及流速进行微调-由粗到精第一次优化流速：2.0ml/min进样口温度：250℃检测口温度：280℃初始柱温：50℃升温速率：20℃/min第二次优化流速：1.0ml/min进样口温度：250℃检测口温度：280℃初始柱温：50℃升温速率：10℃/min第三次优化流速：1.0