E.Coli感受态细胞的制备(氯化铷方法)取冻存的E.coli菌株，在无抗生素的LB平板上划线，37℃培养过夜。挑取一单菌落至3mlLB液体培养基，37℃培养过夜。×4将1ml过夜培养的菌液接入到100mlPsi肉汤培养液中，37℃培养至A550=0.48/A600=0.6×4冰上放置15min。5,000rpm，5min,4℃,收集菌液。除去上清，加入0.4倍原始体积的TfbI溶液，即：100ml菌液加入40ml的TfbI溶液，悬浮沉淀后冰浴15min。×45,000rpm，5min,4℃离心。除去上清，加入0.04倍原始体积的TfbII溶液,冰浴15min后，100ul/管分装。丢入液氮，后放于-70℃冰箱保存。使用时冰上融化。×4相关试剂：离心管50ml20个Ep管200个LB培养基蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl10g在950ml去离子水中完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L,高压灭菌20分钟。Psi肉汤培养基酵母提取物5g蛋白胨20g硫酸镁5g用KOH调节pH值到7.6,加入去离子水至总体积为1L,高压灭菌20min。TfbI醋酸钾0.588g氯化铷2.42g氯化钙0.294g氯化镁2.0g甘油30ml用冰乙酸调节pH至5.8，加水至200ml。高压灭菌20minTfbIIMOPS0.21g氯化钙1.1g氯化铷0.121g甘油15ml用NaOH调节pH值至6.5,加水至100ml,高压灭菌20min