分子生物学常用技术分子生物学常用技术第一节凝胶电泳(gelelectrophoresis)电泳的用途分离鉴定纯度测定分子量凝胶电泳的种类琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳一、琼脂糖凝胶电泳(agarosegelelectrophoresis)（一）分离核酸原理1.电荷效应2.分子筛效应3.分子构象（二）操作要点1.支持物商品化的琼脂糖琼脂糖种类2.凝胶浓度的选择凝胶的制备3.DNAmarkerDNAmarkerDNA长度标准曲线4.电泳缓冲液5.样品制备点样6.电泳条件潜水电泳7.电泳染色EB染色原理紫外灯下显色8.DNA片段的回收（三）应用范围琼脂糖凝胶电泳二、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)（一）分离原理PAGE支持物聚丙烯酰胺凝胶（二）操作要点1.凝胶的分类2.凝胶浓度的选择3.凝胶液的配制PAGE装置电泳4.凝胶中DNA的检测5.DNA片段的回收（三）PAGE优点（四）PAGE应用范围第二节分子杂交一、分子杂交的基本原理分子杂交DNA-RNA杂交条件杂交种类二、固相支持物固相支持物的种类1.硝酸纤维素滤膜2.尼龙膜分子生物学考试三、探针(probe)1.探针的概念2.探针的类型3.标记物的种类4.核酸探针的放射性标记方法缺口翻译随机引物标记法(randompriming)DNA的5’末端标记(5’endlabeling)DNA的5’末端标记四、Southern杂交1.印迹的方法毛细管转移法电转移法真空转移法2.Southern杂交的步骤3.Southern杂交的应用五、Northern杂交Northern杂交六、Western杂交免疫印迹Southern,Northern&Western七、原位杂交(insituhybridization)组织切片八、斑点杂交(dothybridization)第三节PCR技术一、PCR的发展简史二、PCR的基本原理和步骤PCR的原理PCR的扩增产物标准的PCR反应体系三、PCR的影响因素模板引物TaqDNA聚合酶底物Mg2+循环条件四、PCR的种类原位PCR实时PCR的原理五、PCR的应用分子生物学研究临床医学第四节DNA序列测定Sanger双脱氧链终止法DNA的复制2’,3’-双脱氧核苷酸(ddNTP)DNA测序操作DNA自动测序DNA自动测序仪第六节生物芯片(Biochip)基因芯片什么是基因芯片？基因芯片芯片的制备基因芯片的种类基因芯片的应用领域表达谱基因芯片及其检测原理检测原理表达谱基因芯片应用举例