感染性疾病实验室诊断第一节概述感染性疾病:病原体宿主疾病病原体(细菌、真菌、病毒、寄生虫)一、当今感染病得特点1感染性病原体得种类不断发生变迁2宿主得免疫防御能力下降3内源性感染与条件致病菌得感染增加二、感染类型(一)按病原体分类1、传统病原体感染细菌:病毒:真菌:寄生虫2、新发病原体:SARS冠状病毒新甲型H1N1流感病毒高致病性禽流感病毒(二)按疾病特征分类1、病原体被清除2、隐性感染(covertinfection),亦称亚临床感染一般占人群得90％或以上3、显性感染(overtinfection)又称为临床感染发病快慢与病程长短:急性感染与慢性感染感染部位及性质:局部感染与全身感染全身感染:①菌血症②败血症③毒血症④脓毒血症(三)按病原体来源外源性感染内源性感染三、感染性疾病得实验诊断(一)一般实验检测WBC常规检查C-反应蛋白(CRP)血清降钙素原(PCT)器官功能改变得检测(二)病原学实验诊断临床病原体检查目得明确感染病原体指导治疗,预防,判断预后第二节感染性疾病得常用病原学检测一、临床标本得采集与处理(二)标本得处理大家学习辛苦了，还是要坚持二、检验方法查病原体:形态与结构检查分离培养与鉴定检测病原体成分(抗原与核酸)检测患者血清中特异性抗体代谢产物(生化试验)毒素:外毒素、内毒素(一)直接显微镜检查(形态与结构检查)1、染色标本检查法革兰阳性革兰阴性培养在McCoy细胞得沙眼衣原体吉姆萨染色得McCoy细胞,含大衣原体包涵体,使部分细胞核不清楚。(吉姆萨染色,放大1000倍)2、不染色标本1)检查生活状态下细菌得动力及运动状况2)螺旋体由于不易着色并有形态特征对某些病原菌作出初步鉴定,如霍乱弧菌常用方法压片法(压滴法)或悬滴法暗视野显微镜或相差显微镜检查HAVparticlesfoundinfecalextractsbyimmunoelectronmicroscopy(二)分离培养与鉴定药物敏感试验培养特征大肠埃希菌一)病毒分离培养1、动物接种3、组织细胞培养:目前培养病毒应用最广得方法(1)原代与次代细胞培养(2)二倍体细胞培养(3)传代细胞培养识别病毒在培养细胞中增殖病毒在培养细胞中增殖得指标1)细胞病变:细胞病变效应(CPE)、包涵体2)红细胞吸附(hemadsorption)细胞病变效应(CPE):病毒感染细胞后引起得细胞病变,可出现细胞圆缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞等。Cytopathiceffect(CPE)ofprimarysevereacuterespiratorysyndrome–associatedcoronavirusstrain病毒学诊断红细胞凝集抑制(HI)试验原理:病毒病毒(特异性抗体)++红细胞红细胞凝集不凝集血凝现象血凝抑制现象ConfocalimageshowingamacrophageinthelungofamouseinfectedwithSARS-coronavirus、DoubleimmunofluorescencelabelsthemacrophageinredwithantibodiesagainstMac-2andviralproteiningreenwithantibodiesagainstspike、(三)真菌得分离培养－常用培养基沙保(Sabourud)培养基真菌得菌落有两种:酵母型菌落与丝状菌落(三)鉴定检测程序(三)病原体抗原与抗体得检测夹心ELISA(检测抗原)间接ELISA(检测抗体)(四)病原体核酸检测核酸分子杂交(nucleicacidmoleculahybridization)2、PCR核酸检测结果评价检测病原体微生物最灵敏得方法早期诊断现症感染假阳性与假阴性(五)细菌毒素得检测1、内毒素得测定常用方法:鲎试验(limulustests)内毒素与鲎试剂接触时,可激活凝固酶原,使可溶性得凝固蛋白原变成凝胶状态得凝固蛋白2、外毒素得测定(2)体外毒力试验以细菌外毒素得特异性免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗原)进行抗原抗体反应,来检测外毒素,从而鉴定细菌就是否产生该种毒素。白喉棒状杆菌得Elek平板毒力测定(３)免疫学方法:如ELISA法葡萄球菌肠毒素、肠产毒型大肠埃希菌LT及ST等得测定(4)分子技术Elek平板试验(六)体外抗菌药物敏感试验第三节常见感染性疾病得实验诊断(二)血流感染得病原学检查1、血液标本采集与运送采血时间:寒战或体温高峰到来之前0、5~1hr24小时内采集2~3次采血量:成人5~10ml,婴