学号编号研究类型基础研究分类号Q51毕业论文（设计）Bachelor’sThesis论文题目精氨酸激酶（AK）的提取与纯化作者姓名指导教师所在院系专业名称完成时间主要符号对照表AK精氨酸激酶E.coli大肠杆菌IPTG异丙基硫代-β-D-半乳糖苷Kanamycin卡拉霉素CMCCM-CelluloseS-100SephacrylTM-1002-mercaptoethanol巯基乙醇Glycine甘氨酸PMSF苯甲基磺酰氟EDTA乙二胺四乙酸NaN3迭氮钠Arg精氨酸ADP二磷酸腺苷ATP三磷酸腺苷h小时min分钟目录TOC\o"1-2"\h\z\uHYPERLINK\l"_Toc170481064"1引言PAGEREF_Toc170481064\h1HYPERLINK\l"_Toc170481065"1.1精氨酸激酶（AK）PAGEREF_Toc170481065\h1HYPERLINK\l"_Toc170481066"1.2蛋白质的分离与纯化PAGEREF_Toc170481066\h2HYPERLINK\l"_Toc170481068"2实验试剂以及实验仪器：PAGEREF_Toc170481068\h5HYPERLINK\l"_Toc170481069"2.1实验材料PAGEREF_Toc170481069\h5HYPERLINK\l"_Toc170481070"2.2主要实验试剂与仪器PAGEREF_Toc170481070\h8HYPERLINK\l"_Toc170481071"3实验方法PAGEREF_Toc170481071\h9HYPERLINK\l"_Toc170481072"3.1活化菌种PAGEREF_Toc170481072\h9HYPERLINK\l"_Toc170481073"3.2扩大培养PAGEREF_Toc170481073\h9HYPERLINK\l"_Toc170481074"3.3IPTG诱导AK基因的表达PAGEREF_Toc170481074\h9HYPERLINK\l"_Toc170481075"3.4蛋白质提取PAGEREF_Toc170481075\h9HYPERLINK\l"_Toc170481076"3.5蛋白质的检测PAGEREF_Toc170481076\h10HYPERLINK\l"_Toc170481077"3.6蛋白质的纯化PAGEREF_Toc170481077\h10HYPERLINK\l"_Toc170481078"4结果与分析PAGEREF_Toc170481078\h12HYPERLINK\l"_Toc170481079"4.1AK诱导表达电泳图PAGEREF_Toc170481079\h12HYPERLINK\l"_Toc170481080"4.2蛋白质经CMC离子交换的层析谱图和电泳图PAGEREF_Toc170481080\h13HYPERLINK\l"_Toc170481081"4.3蛋白质经分子筛S-100交换的层析谱图和电泳图PAGEREF_Toc170481081\h14HYPERLINK\l"_Toc170481082"4.4蛋白质经Q－sepharose阳离子交换的层析谱图和电泳图PAGEREF_Toc170481082\h16HYPERLINK\l"_Toc170481083"4.5AK经各步纯化后的SDS-PAGE电泳图谱PAGEREF_Toc170481083\h17HYPERLINK\l"_Toc170481084"5讨论PAGEREF_Toc170481084\h18HYPERLINK\l"_Toc170481085"参考文献：PAGEREF_Toc170481085\h20精氨酸激酶（AK）的提取与纯化摘要：精氨酸激酶（ATP：N-精氨酸磷酸转移酶EC2.7.3.3）存在无脊椎动物中，是参与细胞代谢的磷酸激酶。重组有AK基因的E.coliRosetta，在含有50μg/ml的卡纳霉素的LB培养基中培养。当A600达到0.6-0.8时，用终浓度为0.2mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养3小时。加裂解液后用超声破壁离心取上清，得到精氨酸激酶粗提液。通过CM-Cellulose阳离子交换层析，Seph