栀子及其近缘类群的随机扩增多态DNA分析【摘要】目的探索栀子与其变种雀舌栀子、重瓣栀子及变型水栀子之间的亲缘关系。方法从56个随机引物中筛选出12个引物对栀子及其近缘类群进行RAPD分析，分析中的Jaccard方法计算任意两样品间的相似系数，用组内聚类方法计算得出聚类树状。结果共得到251个有效位点。聚类分析显示，栀子与重瓣栀子最先聚类，然后与水栀子聚类，最后与雀舌栀子聚类。结论重瓣栀子与栀子亲缘关系最近，雀舌栀子与栀子的亲缘关系最远。【关键词】栀子；近缘类群；随机扩增多态DNARAPDAnalysisforGardeniajasminoidesandRelativesAbstract：ObjectiveToproberelativerelationshipamongGardeniajasminoides，itsvarietasanditsforma.MethodsRAPDanalysisforsamplesofGardeniajasminoidesandrelativeswereperformedby12randomprimersscreenedfrom56.ProximitymatrixwasanalyzedbySPSSversionandrescaleddistanceclustercombinewasobtainedbyclusteranalysiswithingroups.ResultsAtotalof251polymorphiclociwereshowedthatGardeniajasminoideswereclusteredwithG.jasminoidesfortunianaatfirst,thenwithG.jasminoidesEllis.f.longicarpa,andwithG.jasminoidesEllis.var.radicansatsamples,GardeniajasminoideswastheclosestrelativetoG.jasminoidesfortuniana,andmostdistantrelativetoG.jasminoidesEllis.var.radicans.Keywords：Gardeniajasminoides；Relatives；RAPD栀子为常用中药，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效。分布在长江流域及以南地区，为酸性土壤指示植物。栀子有3变种和1变型［1～7］，即栀子GardeniajasminoidesEllis.、雀舌栀子G.jasminoidesEllis.var.radicansMakino、重瓣栀子G.jasminoidesEllis.var.fortunianaHara.、大花栀子G.jasminodesvar.grandifloraNakai.、水栀子G.jasminoidesEllis.f.longicarpaetOkada.，它们在形态结构上均具有一定的差异，为了探索它们之间的亲缘关系，笔者采用随机扩增多态DNA的技术对其进行了分析。1器材仪器PTC－100TMProgrammableThermalController，高速离心机IECMicro－MBcentrifuge，DZKW-C型水浴锅，DYY－Ⅲ－5型稳压稳流电泳仪，凝胶紫外成像系统，核酸紫外定量仪GENEQUANTII。试剂Taq酶，琼脂糖，dNTP，CTAB，溴化乙锭，Tris碱，EDTA，巯基乙醇，随机引物，其余试剂为北京化工厂产的分析纯。材料栀子、雀舌栀子、重瓣栀子、水栀子的叶片均由笔者采集鉴定，用硅胶快速干燥保存，样品采取混合取样，编号见表1。2方法DNA提取和浓度测定将干叶片约mg置于mlEP管中，加入液氮约30s后用镊子碾碎成细粉，立即加入500μl2×CTAB提取缓冲液［CTAB2％，Tris-HCl(pH)100mmol·L-1，EDTA20mmol·L-1,NaClmol·L-1,巯基乙醇2％］和20μl巯基乙醇，60℃水浴保温1h后，加入氯仿－异戊醇抽提，轻颠倒混匀，10000r·min-1离心10min，吸取上清液，加入等体积CTAB沉淀缓冲液［CTAB1％，Tris-HCl(pH)50mmol·L-1，EDTA10mmol·L-1,巯基乙醇1％］,室温下放置h以上，10000r·min-1离心10min，小心倾去上清液，沉淀用70％乙醇和无水乙醇各轻洗1次，弃洗液，留沉淀挥干。用20μlTE溶解备用。用％琼脂糖凝胶电泳，以λDNA作对照和用核酸紫外定量仪测定浓度相结合。表1实验材料来源、采集时间DNA浓度的选择用S267引物对DNA模板的不同浓度扩增结果比较，选择扩增效果好的浓度进行扩增。PCR扩增25μl反应体系：dNTPs10mmol·μl，引物