会计学简介基本步骤/分离基因/目的基因制备和载体系统PCR反应PCR反应过程利用cDNA法cDNA链的合成分离基因质粒载体质粒载体pBR322pUC19质粒λ噬菌体λ噬菌体载体柯氏质粒Cosmid分离基因几种有效的转基因方法基因转移的方法DNA-磷酸钙沉淀法脂质体（liposome）介导的基因转移显微注射DNA显微操作仪显微操作仪的使用显微注射法的优点基因枪介导的DNA转移基因枪转化的原理(2)基因枪轰击法（微弹轰击技术micro-projectilebombardment)将外源DNA包裹在微小的钨粉或金粉颗粒的表面，借助高压动力射入受体细胞或组织，最后整合到植物基因组并得以表达。步骤简单易行：适合于大多数细胞或组织，克服了受体材料的限制，不必制备原生质体，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。到目前为止，利用基因枪法已经在烟草、豆类和多数禾本科农作物、果树花卉和林木等植物上获得转基因植株。/决定基因枪使用成功的因素农杆菌与植物细胞相互作用的机制土壤农杆菌转化法农杆菌:usedextensivelyforgeneticengineeringofplants.包含Ti质粒Tumorinducingplasmid(bacterialplasmid)T-DNA(Transferred-DNA),可以转移进入植物基因组.TiPlasmid报告基因:Gus基因（β-葡糖苷酸酶基因）在植物细胞中所产生的葡糖苷酸酶在检测上具有以下特点：①在一定条件下与X-G1ucuionicacid（5-bromo-4-chioro-3-indoyl-β-D-glucuronicacid）底物发生作用，产生蓝色沉淀，既可以用分光光度计法测定，又可以直接观察到植物组织中形成的蓝色斑点。②当加入4-甲基伞形酮基和葡萄糖苷酸时生成4-甲基伞形酮，发荧光（λ=465nm）。因而可以用荧光光谱法测定。由于荧光强度高，本底低，故荧光检测极为灵敏。③检测容易、迅速并能定量，只需少量植物组织抽提液即可在短时间内测定完毕。④价格便宜。/GFP（绿色荧光蛋白基因）;LUC(萤火虫荧光素酶基因);表达荧光的转基因鱼/转基因技术动物TransgenicAnimal一、概述1976年Jaenisch等获得含有SV40DNA的嵌合体小鼠。1980年，Gordon应用显微注射法首次成功地将重组的外源DNA直接注入小鼠受精卵雄原核中，获得了携带外源基因小鼠。1982，Palmiter将大鼠的生长激素基因用微注射方法导入小鼠的受精卵中获得巨型小鼠（supermouse），从而在理论上和实践意义上都将转基因技术提高一步，引起生物学界极大的关注，为基因工程育种提供诱人的前景。早期以提高生长为主以生产药用蛋白和可移植的器官/谈家桢院士（左）、著名老中医徐蔚霖教授（右），曾溢滔院士（中），转基因试管牛“滔滔”转基因熊猫狗哺乳动物转基因技术的研究意义1、在基础生物学中2、在基础医学研究中3、在畜牧业中外源基因的导入方法1）显微注射法（microinjection）2）逆转录病毒介导法3）胚胎干细胞法4）精子载体法意大利Lavitrano等1989年首次报道利用精子作为载体获得了转基因小鼠。5）细胞核移植法6）生殖细胞转染法