第十二章高效液相色谱分析教学目标及要求：1.掌握液相色谱的特点；2.掌握液相色谱法的分类；3.了解影响液相色谱峰扩展及色谱分离的因素；4.理解液相色谱分离的原理；5.了解液相色谱的固定相和流动相；6.了解液相色谱仪的组成和结构原理及主要部件；7.了解液相色谱分离类型的选择；8.了解液相色谱的应用。教学重点、教学难点：1.高效液相色谱与气相色谱的异同点2.高效液相色谱速率理论方程式在实验条件优化中的应用3.分离柱和流动相的选择和匹配4.不同种类液相色谱分离的原理上的差异第一节高效液相色谱法概述Generalizationofhighperformanceliquidchromatograph高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。(一)、HPLC与经典LC区别(二)、HPLC与GC异同点流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用。HPLC：流动相为液体组分与流动相和固定间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用。流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性二、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph三、高效液相色谱法的特点和应用四、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC2.主要部件P83(2)梯度淋洗装置2024/10/5(3)进样装置(4)高效分离柱理想的HPLC检测器应具有如下特性：第一，具有高灵敏度和可预测的响应；第二，对样品所有组分都有响应，或具有可预测的特异性，适用范围广；第三，温度和洗脱液流速的变化对响应没有影响；第四，响应与洗脱液组成无关，因此可作梯度洗脱；第五，死体积小，不造成柱外谱带扩展；第六，使用方便、可靠、耐用，易清洗和检修；第七，响应值随样品组分量的增加而线性增加，线性范围宽；第八，不破坏样品组分；第九，能对被检测的峰提供定性和定量信息；第十，响应时间快。分类标准按测量原理分a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。b.光电二极管阵列检测器2024/10/5光电二极管阵列检测器c.示差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）示差折光检测器d.荧光检测器（fluorescencedetector）一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph四、离子色谱ionchromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph六、排阻色谱size-exclusionchromatograph七、亲和色谱(AC)Affinitychromatograph一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatography二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatography固定相有机基团主要有三类：1.疏水基团:如不同链长的烷烃（C8，C18，C6等）。2.极性基团：如丙胺基，氰乙基，醚和醇等。3.离子交换基团：如作为阴离子交换基团的胺基，季铵盐。作为阳离子交换基团的磺酸基等。三、离子交换色谱ion-exchangechromatography流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长。阳离子交换：阴离子交换：离子交换反应达到平衡时，保留值决定于平衡常数。容量因子k’与平衡常数K成正比，且与流动相中的反离子浓度（M+、X-）成反比。应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸、蛋白质等。四、离子色谱ionchromatography离子色谱仪离子色谱法原理principleofIC离子交换原理，与传统离子交换的不同点：采用交换容量非常低的特制离子交换树脂