生化分离工程实验助教学生：赵有文zhaoyouwen1987@yahoo.com.cn刘舒liushude101@163.com胡轶敏huyimin11@163.com危雅乐yale.happy@163.com1组李佳佳（组长）董奇峰吴婷婷杨后召菌株的优化培养重组表达质粒转化E.coliBL21本次试验的主要内容目的基因的背景资料生化分离工程实验（星期五）生化分离工程实验（星期五）PCR体系ThepMAL-c2seriesofvectorshaveanexactdeletionofthemalEsignalsequence,resultingincytoplasmicexpressionofthefusionprotein.ThepMAL-p2seriesofvectorscontainthenormalmalEsignalsequence,whichdirectsthefusionproteinthroughthecytoplasmicmembrane,andthefusionproteinscanbeexportedtotheperiplasm表达系统四，配试剂生化分离工程实验（星期五）组氨酸和Ni-NTA亲和作用原理6×His/Ni-NTA亲和纯化步骤系统原理示意图Ni柱的清洗与保存第1步：2倍体积6M盐酸胍，0.2M醋酸第2步：2倍体积水第3步：1倍体积2%SDS（注意低温容易析出）第4步：1倍体积25%乙醇第5步：1倍体积50%乙醇第6步：1倍体积75%乙醇第7步：5倍体积100%乙醇第8步：1倍体积75%乙醇第9步：1倍体积50%乙醇第10步：1倍体积25%乙醇第11步：1倍体积水第12步：5倍体积100mMEDTA，pH8.0第13步：3倍体积水直链淀粉柱的再生生化分离工程实验（星期六）二，蛋白纯化系统三，SDS—PAGE样品的制备无细胞体系生化分离工程实验（星期六）管号管号生化分离工程实验（星期六）生化分离工程实验（星期天）SDS-PAGE的原理浓缩效应和分子筛效应菌株的优化培养PCR体系四，配试剂生化分离工程实验（星期六）无细胞体系