JIANGSUUNIVERSITY实验报告系别：药学院班级：制药0901姓名：张丽琴学号：3090902007实验二紫外-可见分光光度计的使用试验目的了解紫外-可见分光光度计的基本结构与特点，掌握仪器的使用方法。熟悉测绘吸收曲线的一般方法掌握紫外-可见分光光度法定量的方法熟悉平行原则的应用试验原理电子跃迁原理实验步骤（一）仪器的使用方法1、接通电源，打开样品室盖，预热20min2、比色皿的使用：比色皿不用时浸泡于醇溶液中；使用时手拿比色皿的毛玻璃面，将比色皿用蒸馏水冲洗几遍，然后用待测溶液冲洗两次，然后将待测溶液加入比色皿中，加入溶液体积约为比色皿的2/3或3/4；将比色皿外壁用卷纸擦干，并且保持透光面洁净，不能有影响光透过的纸屑或痕迹。将比色皿放入光路中，注意比色皿在光路中的方向最好始终保持一致；3、选择波长，比色皿中置空白溶液，打开样品室盖调节使T读数为零，关上样品室盖调节使T为100%，反复调节几次，直至读数稳定。(注：改变波长时均需重新调0和100%)4、比色皿配对。将其他比色皿盛放相同的空白溶液，测定其他比色皿与刚才调0，调100%的比色皿的吸光度差值，并且记录。选择吸收值小的比色皿作为对照皿；记录其他比色皿与对照比色皿的差值。测定时顺序勿颠倒。5、测定物质吸光度。测定时溶液浓度从稀到浓测定。每次荡洗比色皿1~2次。注意勿将溶液洒于样品室，否则须立即擦干。6、记录吸光度值。7、测定完毕洗净比色皿，置于醇溶液中，关闭电源。（二）标准曲线的制作样品溶液的测定：配置浓度为0.5000mg/ml的标准苯甲酸钠储备液100ml。标准溶液的配置分别吸取标准苯甲酸钠储备液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml至5只100ml量瓶中，用0.1mol/LHCl溶液（9→1000）稀释至刻度，定容，得系列浓度的标准苯甲酸钠溶液。（预先已经配好）标准曲线的制作以0.1mol/LHCl溶液为参比，分别测定各溶液在240nm处的吸收度A值，以A为y轴，进行线性回归，得工作曲线和相关系数r。样品溶液测定：精密吸取样品溶液2.0ml至100ml容量瓶，用0.1MHCl稀释至刻度。计算样品液的浓度。6、数据记录：编号123456待测液体C(μg/ml)0510152025A240nm0.0080.1480.3130.4330.5330.6200.477（三）实验结束1、测定完毕将台面清理干净。2、绘制标准曲线，求待测溶液浓度。每次测量后的结果需减去0.008，则结果为：编号123456待测液体C(μg/ml)051015202519A240nm00.1400.3050.4250.5250.6120.469当A=0.496时，带入y=0.0233x+0.0522得：x=19,即：待测液浓度为19(μg/ml).注意事项吸收池配对。注意比色皿每次测定时的方向。比色皿要保持清洁，池壁上液滴应用绸布或擦镜纸擦干，不能用手拿透光玻璃面。测定吸光度，溶液由稀至浓进行测定。遵守平行原则（加试剂的量、顺序、时间尽量一致）测定样品前应检查所用溶剂在测定样品所用波长附近是否有吸收，要求不得有干扰吸收峰。样品溶液浓度应适当，一般应使测得的吸收度控制在0.2~0.7。操作结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出，必须及时用吸水纸吸干，否则会引起测量误差或影响仪器使用寿命。仪器各部存放有干燥剂，发现干燥剂变色立即更换或烘干在用。仪器每次使用完毕后，请用防尘罩罩住。五、思考题使用分光光度计时，待测溶液的吸光度数值应控制在什么范围？为什么？如何控制？答：待测液的吸光度数值应控制在0.2-0.8之间，因为在这一吸光度范围内测量时读数误差最小；如果被测液的吸光度比较大，那应该稀释后再测量，如果待测液的吸光度比较小，则可以取待测液被稀释之前的适宜浓度时再次测量。苯甲酸钠紫外吸收属于何种分子跃迁？答：（1）n→（2）→实验心得在学习了几周的紫外-可见分光光度计理论课程之后，终于有机会在实验室亲自设计和操作分光光度计了，这对我来说，无疑是一次很大的挑战。实验一开始，实验老师为我们细致地讲解了这次实验的目的、原理、过程和注意事项，为了让大家理解的更全面，老师还专门为大家讲解了石英比色皿的外形和用法。实验老师的讲解井井有条，同学们也听得绘声绘色。听完了老师的讲解之后，带着好奇，带着激动，我们开始了紧张的实验操作，八名同学一组，进行了简单的任务分工之后，我们都投入了这次试验中。可是，天有不测风云，我们组选的那一台仪器，仪器零点飘忽不定，有同学说可能是因为调整零点的电位器接触不良，也有可能是仪器时间