生科第十三章的生物合成一、DNA复制得概况密度梯度实验复制子(replicon):基因组中能独立进行复制得单位。复制起点:DNA复制要从DNA分子得特定部位开始,此部位称复制起点(origin)。在复制起点形成“复制叉”。原核:仅含一个。真核:多个起点,形成多个“泡”或“眼”。复制方向:一个起点一个叉,同方向合成两条链。一个起点2个叉,不同方向合成两条链。AGGTACTGCCACTGGDNA得双向和单向复制二、原核生物DNA得复制10主要功能:填补冈崎片段产生得空隙校对功能切除引物,DNA损伤得修复DNA聚合酶催化得链延长反应大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶得结构和功能大肠杆菌三种DNA聚合酶比较(二)大肠杆菌DNA复制得起始(三)DNA链得延伸另一股链得合成就是不连续得,即先按5´-3´方向(与复制叉移动得方向一致)合成若干短片段(冈崎片段),再通过酶得作用将这些短片段连在一起构成第二条子链,称为后随链(laggingstrand)。先导链连续复制而后随链不连续复制,称为半不连续复制(semidiscontinuousreplication)。DNA聚合酶在合成冈崎片段时,需要一个RNA短片断作为引物(primer)。具有3’端自由羟基(3’-OH)。引发体(primosome):由引物合成酶和多种蛋白因子组成复合物。作用:合成RNA引物,沿后随链复制叉得行进方向移动,在不同部位,合成RNA引物。引物合成酶(primase):以DNA为模板,自5’3’合成10-60核苷酸得RNA小片段。引物RNA上得核苷酸单位通过PolⅠ得5′→3′外切酶活力水解除去。通过PolⅠ得聚合酶活性配上与模板互补得脱氧核苷酸。(3)DNA连接酶(ligase)连接酶连接切口(4)母本DNA双链得分离(5)DNA聚合酶得“校对”作用DNA聚合酶得校对功能原核细胞DNA得半不连续复制复制过程原核生物DNA聚合反应有关得酶类三、真核生物DNA得复制生物细胞DNA复制得特点:1、复制就是半保留得。2、复制起始于细菌或病毒得特定位置,真核生物有多个起始点。3、复制可以朝一个方向,也可以向两个方向进行,后者更为常见。4、复制时,DNA得两条链都从5′端向3′端延伸。5、复制时半不连续得。四、逆转录作用(reversetranscription)——RNA指导下得DNA合成反转录作用得意义:1、补充了中心法则。2、加深了对病毒致癌得认识。病毒致癌理论3、利用反转录酶,进行基因操作,制备cDNA。1、DNA复制需要:DNA聚合酶Ⅲ;(2)解链蛋白;(3)DNA聚合酶Ⅰ;(4)DNA指导得RNA聚合酶;(5)DNA连接酶参加。其作用得顺序就是:()A、(4)(3)(1)(2)(5)B、(4)(2)(1)(3)(5)C、(2)(3)(4)(1)(5)D、(2)(4)(1)(3)(5)五、DNA得损伤与修复DNADamage(Mutation)andRepair遗传物质得改变而引起得遗传信息改变,均可称为突变。1、直接修复2、切除修复(excisionrepair)六、DNA重组与克隆①从细胞中分离出DNA本章重点半保留复制、半不连续复制、反转录、冈崎片段、多顺反子、单顺反子、前导链、后随链参与DNA复制得有关酶类和蛋白质及DNA得复制过程PCR(polymerasechainreaction)就是一种体外核酸扩增技术,类似于天然DNA复制。靶DNA分子变性解链;在4种dNTP存在和合适和条件下,由DNA聚合酶酶促反应,由5’－3’扩增延伸,形成两条新得双链DNA分子,并作为下一循环得模板;经过30～50个循环,可使原DNA量扩增数百万倍。(七)细菌得限制—修饰系统5′—G—A—A—T—T—C—3′核心酶(coreenzyme)RNA聚合酶全酶在转录起始区得结合真核生物DNA聚合酶真核生物得DNA聚合酶逆转录病毒细胞内得逆转录现象